菌種常見(jiàn)的兩種保存法

菌種用于發(fā)酵過(guò)程作為活細(xì)胞催化劑的微生物，包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來(lái)源于自然界大量的微生物，從中經(jīng)分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于生產(chǎn)。使優(yōu)良菌種的性狀保持穩(wěn)定，人為地創(chuàng)造條件，使菌種的新陳代謝活動(dòng)處于不活潑狀態(tài)，即選取優(yōu)良菌種的休眠體(孢子或芽孢)或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀態(tài)下保存 。

低溫存法

1. 簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3~4個(gè)月;

2. 液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(zhǎng)期保存。

脫水存法

1. 沙土保存法，能產(chǎn)孢子的細(xì)菌、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經(jīng)稀酸處理洗凈過(guò)篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2~3次，烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的孢子，用無(wú)菌蒸餾水2~2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干，外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存，保存期可達(dá)5~7年。

2. 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑(一般用脫脂牛奶或血清)相混合，放在安瓿管內(nèi)于-20~-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽結(jié)凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達(dá)5~10年之久。

3.  石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。