elisa試劑盒 血清學方法瓊脂擴散試驗操作原理

elisa分析檢測試劑盒瓊脂擴散試驗，又稱免疫擴散反應或凝膠沉淀反應，基本原理是可溶性抗原和相應抗體在含有電解質的瓊脂凝膠中擴散相遇，特異性地結合形成肉眼可見的線狀沉淀物的一種免疫血清學技術。
由于瓊脂擴散試驗的操作簡便，不需要特殊設備，且有較好的特異性和檢出率，故已成為一種廣泛應用的免疫學技術。在動物病毒學中廣泛用于檢測病毒抗原和毒型鑒定。應當指出，由于家禽免疫球蛋白的特殊性，瓊脂凝膠中的NaCl含量應為8％，而不是通常的0.85％，使用這樣的濃度可取得更好的結果。

1.操作方法
(1)抗原及抗體分別加入相應孔中，每孔加入50ul。
(2)加好的板放入濕盒中加蓋后置37℃溫箱中24小時觀察結果。
2.判定
(1)強陽性(＋＋＋)：在被檢血清孔與抗原孔之間有明顯的沉淀線，并與標準陽性血清的沉淀線末端互相連接者。
(2)陽性(＋＋)：在被檢血清孔與抗原孔之間有較弱的沉淀線，并與標準陽性血清的沉淀線末端互相連接者。
(3)弱陽性(＋)：標準陽性血清孔與抗原孔之間的沉淀線末端向被檢血清孔內側彎曲者。
(4)疑似(±)：標準陽性血清孔與抗原孔之間出現的沉淀線末端向被檢血清孔內側偏彎或微彎者。
(5)陰性(－)：被檢血清孔與抗原孔之間不形成沉淀線，或者標準陽性血清的沉淀線向相鄰的被檢血清孔直伸或向外側偏彎者，判定為陰性。被檢血清孔與抗原孔間出現的沉淀線與標準陽性血清的沉淀線呈現交叉現象時，為非特異反應，判為陰性。
3．注意事項
(1)瓊脂質量影響試驗結果，一般應用精制瓊脂粉或瓊脂糖配制瓊脂凝膠板。
(2)孔徑大、孔距小，較易出現沉淀線，但孔距太小，不易鑒別兩條以上的沉淀線，故在病毒抗原分析時，孔距不宜太小。
(3)一般認為37℃感作比較容易出沉淀線，但對易于失效的病毒抗原，可置室溫或4℃感作。
(4)抗原、抗體的濃度越高，出現沉淀線的時間越快，故必要時，可將抗原、抗體先作適當的濃縮處理。
4．染色
為提高沉淀線的可見度，或需長期保存標本時，可按下述方法處理標本并染色。
(1)漂洗：將瓊脂板用綢布包裹后，浸泡于鹽水中12小時，其間換液2～3次，再以蒸餾水浸泡5～6小時，其間換液2次，借以除去未結合的蛋白質。
(2)固定：解開綢布，將瓊脂板浸入70％酒精配制的2％醋酸溶液中固定1小時。
(3)染色：首先配制醋酸-甲醇液，即取10ml冰醋酸、20ml水和70ml甲醇混合。再取氨基黑的10B0.1g溶于100ml醋酸-甲醇液中，即為氨基黑染色液。
將固定好的瓊脂擴散板浸泡于氨基黑染色液中10分鐘，再用醋酸-甲醇液洗去底色，干燥后即可長期保存。
elisa分析檢測試劑盒瓊脂凝膠的含水量極大，常用瓊脂凝膠(1％～1.2％)含水98％以上，可使分子量20萬以下的大分子物質自由通過。由于大多數抗原和抗體的分子量都在20萬以下，所以能在瓊脂凝膠中自由擴散。當抗原和抗體相應且比例適當，兩者相遇就會出現一條沉淀線。一對抗原和抗體，形成一條沉淀線，故可應用瓊脂擴散試驗鑒定抗原和抗體成分、抗體的純度、抗原或抗體的相對效價等。
    1,2,3,4-四氫-1-萘胺    N-異丙基-4哌啶甲酸
二月桂酸二正辛基錫    4-氟-2-(三氟甲基)苯酚    2-溴-6-氰基吡啶
2-氟-3-溴-5-甲基吡啶    3,5-二甲氧基肉桂酸    2-三氟甲基苯磺酰胺
3-溴-2-硝基吡啶    (R)-2-BOC-氨甲基吡咯烷    4-羥基-6,7-二甲氧基喹啉
2-氨基-3-硝基-5-氟吡啶     5-丙氧基-4-甲基-1,2,4-三唑啉酮
2,6-二氟-3-硝基苯胺    組胺磷酸鹽    1,4-苯二甲硫醇
4-甲基-5-羥基呋喃-2-酮    2-氯*酮    4-氟苯甲脒鹽酸鹽
7-羥基-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉    環己甲酰氯    3-甲基-4-異丙基苯酚
4-氟鄰苯二甲酸酐    Fmoc-L-3-氰基苯丙氨酸    2-氟-5-硝基苯乙酸
尼可地爾    4-甲氧基-2-氟苯胺鹽酸鹽    1-((氰基-1-甲基乙基)偶氮)甲酰胺
4-氯-3,5-二硝基苯甲酸    3-(4-甲氧苯基)-3-羰基丙酸甲酯    3-苯基吡啶
4-(4-哌啶基)嗎啉    L-甲基多巴    2-甲基煙酸甲酯
1,1-二乙基己烷    3-氯-4-甲基苯甲腈    4-(4-氟苯甲酰基)丁酸
2,3-二氯苯肼鹽酸鹽    氧化-4-甲基嗎啉一水合物    乙酰丙酮亞鐵
2-氯-3-硝基苯甲醚    2-氟-4-碘煙酸    丙二醇二乙酸酯
對甲基苯甲醇草酸二酯    3,4-二氨基苯甲腈    4-環戊基嗎啉
3-溴噻吩-2-甲酸    3-乙酰基苯硼酸    2-(2-氯乙氧基)乙酸甲酯

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