20min全能基因組DNA提取試劑盒 返回列表頁

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產品介紹：

20min全能基因組DNA提取試劑盒該試劑盒采用裂解液，可快速可靠的從動物組織、細胞、細菌、病毒、全血、血清、血漿、體液、病毒液、棉拭孖等樣品中純化出高純度的 DNA。可直接用于限制性酶切反應、PCR、文庫構建、Southern 雜交等多種分子生物學實驗。

操作方法：
（一）RNA 含量較高的動物組織、細胞、細菌樣本的提取方法
（1） 樣品組織懸液的制備：動物組織用研缽研磨：將動物組織研磨粉碎，并取 40~60 mg 加入到 1.5ml EP 管中，加入 280 μl 無菌水，漩渦震蕩 10s混合均勻，打開管蓋加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液和 5 μl 的 RnaseA，漩渦震蕩 10s 混合均勻，室溫消化 5min，以去除RNA。動物組織用鋼珠研磨：取 50~80 mg 組織加入到 400 μl 無菌水，在研磨儀上研磨 1min。在 1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的Buffer AP4 裂解液，并在管蓋上加入 5 μl 的 RnaseA，取 280 μl 研磨好的組織懸液到 1.5 ml EP 管中，漩渦 10s 混合均勻，室溫消化 5min，以去除 RNA。懸浮的細胞（104~108 個）或細菌（106~1011 個）：在 1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液，并在管蓋上加入5 μl 的 Rnase A，直接吸取 280 μl 樣品到上述 EP 管中，漩渦震蕩 10s 混合均勻，室溫消化 5min，以去除 RNA。細胞或細菌沉淀：可用 280 μl 無菌水重懸細胞和細菌沉淀，并加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液和 5 μl 的 RnaseA，漩渦震蕩 10s 混合均勻，室溫消化 5min，以去除 RNA。
（2）RNA 消化完畢后，向上述溶液中加入 20 μl 的蛋白酶 K，漩渦 10s 混合均勻，并置于 56℃水浴鍋(或室溫條件下)中消化 5min。
（3）消化完畢后，向上述溶液中加入 500 μl 的 Buffer LB5，漩渦混合 15s 后，13000rpm 最高轉速離心 2min。將上清液倒入到吸附柱中。
（4）13000rpm 離心 1min，棄過柱液。向吸附柱中加入 500 μl 的 Washing Buffer，13000rpm 離心 15s。棄過柱液，并重復此步驟一次。
（5）將吸附柱重新放回離心機，13000rpm 空離心 2min，將殘留的乙醇甩干。
（6）將吸附柱芯放入到 1.5 ml 收集管中，向吸附柱芯中加入 60~150 μl DNA Elution Buffer，室溫放置 1min，13,000rpm離心 2min，洗脫液即為基因組 DNA，冷凍保存。
（二）RNA 含量較低的樣本（全血、血清、血漿、體液、病毒液、棉拭孖浸泡液等）的提取方法在 1.5 ml EP 管底部預先加入 50 μl 的 Buffer AP4 裂解液，在管蓋上加入 20 μl 的蛋白酶 K，直接吸取 280 μl 的液體樣本到 Buffer AP4 裂解液中。上下顛倒，并漩渦混合 10s，使得樣品、Buffer AP4 裂解液、蛋白酶 K 混合均勻，并置于 56℃水浴鍋中（或室溫）消化 5min。按照上述步驟（3）-（6）進行上柱、漂洗、洗脫操作。

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