ELISA原理與技術要點

    ELISA原理實驗條件和技術要點:

    ELISA原理

　　ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法

    在應用ELISA時，首先要清楚下面內容：1，是檢測抗體還是抗原？2，檢測的結果是定性還是定量？3，是否需要檢測特異抗體的類型？4，所用抗體/單克隆抗體的親和力怎樣？

    （1）檢測抗原  zui常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法，其次是競爭法。但競爭法在具體實驗中有些困難，特別是檢測微生物的抗原，因為需要標記抗原，這對于某些抗原是很難做到的，甚至是不可能的。另外在競爭法中，酶標記的抗原與標本直接混合在一起，許多標本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質，可影響ELISA的結果。

    （2）檢測抗體  檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法，這個方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM.。這個方法的*步是捕獲所需要檢測的一個種類的抗體，接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時比較簡單，但不適用于檢測其他種類的抗體，因為血清中如果有特異IgG存在將與IgM或IgA等競爭結合抗原。

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