技術分析：ELISA實驗常見問題解答

吉林醫藥學院張老師前期在我司訂購小鼠ELISA試劑盒，之后咨詢我司相關問題，錢及時技術人員為張老師解答，解答詳情如下：

1、為什么ELISA實驗必須設置復孔？

答：為獲得更準確的實驗結果，強烈建議標準品及樣本進行復孔檢測，因為復孔檢測可以：計算平均值，確保實驗結果更準確；解決實驗中誤操作造成的跳孔現象；計算CV值，對實驗的操作和試劑盒的精密度進行評估。

2、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作？

答：溫度是ELISA結合反應的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應，實驗前務必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動力學反應差異而導致ELISA檢測結果的不準確。

3、 重復性差是怎么回事？

答：對于這一點，很有可能是：

① 樣品數量不一，加樣時間長短不一（恒遠來解決：重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近）。

③ 酶標儀濾光片不對或輸入波長不對（恒遠來解決：TMB顯色用450/630波長）。

④ 酶標儀測定重復性差（恒遠來解決：校對酶標儀）。

4、為什么標準曲線線性較差？ 

答：需要按照推薦方式保存標準品；溶解標準品之前需短暫離心，*收集粉末；確保標準品*溶解和混勻，然后再進行后續的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且移液；顯色的恰當終止；選擇合適的數學擬合方程繪制標準曲線。