如何選擇液相色譜儀的梯度洗脫與等度洗脫

有些色譜知識的都知道，液相色譜儀的梯度洗脫和氣相色譜儀中的程序升溫類似，給色譜分離帶來很大的方便，已成為液相色譜儀*的部分。

那么問題來了，什么是梯度洗脫？比等度洗脫有什么優點呢？所謂梯度洗脫，就是有兩種或兩種以上不同極性的溶劑，在分離過程中按照一定程序連續地改變，以改變流動相的配比和極性。通常用的流動相為二元溶劑。在梯度運行期間，強溶劑B（如反相HPLC中的甲醇）的濃度增大。一般以這種溶劑中強溶劑B的體積比（%B）表示。

一、現在有許多實驗室在使用液相色譜儀的梯度洗脫技術，這是因為梯度洗脫可克服等度洗脫中的一些弱點問題：

1、減少手工比例配比流動相，從而避免由此引起的誤差；

2、 避免早流出峰分離度不好的缺點；

3、避免晚流出峰峰變快峰高降低的缺點；

4、 避免混合物容量因子范圍寬時分析時間長的缺點；

5、 避免保留時間長的組分污染色譜柱的缺點。

二、梯度洗脫液相色譜儀適合于以下幾種分析情況：

1、 具有較寬容量因子范圍的樣品，即組分較為復雜的；

2 、大分子樣品，相對分子質量大于1000的，尤其是生物樣品。

3 、一些含有高保留時間的組分會干擾樣品分析，如果在一次分析中不能把它洗脫出去，就會殘留污染色譜柱，并影響下一次的樣品分析。

4、 即使在使用等度時也可以使用梯度洗脫選擇流動相的比例。

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