gⅥ-cDNA噬菌粒文庫的獲取和純化

 [方法]
A．噬菌體顆粒文庫的獲取
1．在lOOml的搖瓶中加50ul的甘油菌（8X108個細胞）到20m1的LBAT，在37℃振蕩（260r/min）培養2～3小時（或OD600nm達到0．5～0．7）。
2．在感染多樣性為10：1的條件下加R408輔助噬菌體。
3．在37℃無振蕩條件下溫育細胞30分鐘。
4．將已感染細胞轉移到加有lOOml預加熱的LBAT的1 L搖瓶中。
5，在30℃振蕩（260 r/min）條件下過夜培養。
B．噬菌體顆粒文庫的純化
1．將培養物轉移到50ml聚乙烯管中，并在4℃3500g條件下離心30分鐘。
2．用0．45um過濾器濾除上清液（用一個新的聚乙烯管），并加1/5體積的PEG/NaCl。
3．混合均勻，在冰浴中培養1小時。
4．在4℃，3500g的條件下離心20分鐘，除去上清液然后在4℃，4000g的條件下離心3分鐘，后盡量除去上清液。
5．在0．5ml的PBS和5％（體積分數）的無菌甘油中打散沉淀，再一起轉移到一個新的微離心管中。
6．在14000g微離心機中旋轉以除去細胞碎片，將上清液轉移到一新的微離心管中。
7．通過檢測260nm的吸收值來計算噬菌體的濃度，一吸收單位相當于4.4×1013個噬菌體轉化單位。
8．為了儲存在新的微離心管中將噬菌體均等分為250ul，在-20℃冷凍并儲存。