用可溶性*化抗原進行選擇

1．使用廠商*的試劑盒對抗原進行*化。如果用DTT洗脫，可以采用NHS—SS*。
2．用2％MPBS封閉1．5ml微量離心管，室溫1小時；然后，棄去封閉緩沖液。
3．在1個1．5ml微量離心管中，用2％MPBS封閉100ul鏈霉親和素磁珠，室溫1小時。封閉后，用磁性試管架將磁珠吸向一側，收集磁珠。棄去緩沖液。
4，預先削減文庫中結合鏈霉親和素的抗體：在2％MPBS中將1012～1013個噬菌體（首輪選擇時為1013個，其后選擇為1012個）與100ul鏈霉親和素磁珠孵育1小時，反應體積為lml。用磁性試管架將磁珠拉向一側，收集噬菌體抗體并棄去磁珠。
5．在已封閉處理的試管中，加入lml預先削減的噬菌體抗體，再加入*化抗原（100～500nmol/L）。轉臺上轉動，室溫孵育1小時。
6．將已封閉的100ul鏈霉親和素磁珠加入試管，并在轉臺上室溫孵育15分鐘。將試管放在磁架30秒。磁珠將移向磁鐵。
7．抽吸試管，讓磁珠留在微量離心管側面。是用1個200ul吸頭套在巴氏滴管上，再接到真空源上進行抽吸操作。用PBS/Tween洗滌磁珠7次（每次lml），接著用MPBS洗滌2次以及用PBS洗滌1次。每隔一次洗滌后，將磁珠轉移至1個新的1．5m1試管內，將有助于有效洗滌。
8．加入lmll00mmol/L三乙基胺洗脫噬菌體，給試管加蓋；并來回轉動8分鐘。用磁架將磁珠拉向一側，并將溶液轉移到1個含有500ul lmol/L Tris（pH 7．4）的Eppendorf管中。
9．繼續進行步驟7前面的流程來準備次輪選擇。根據洗脫的噬菌體滴度情況，次輪選擇所用抗原濃度可以降低為原來的1/11。