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    酶聯(lián)免疫吸附測定法簡介及原理

    時間:2013-5-7閱讀:516
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    酶聯(lián)免疫吸附測定法簡介及原理
    酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay),簡稱ELISA,是實驗室zui常用的檢測方法。酶是能夠催化化學(xué)反應(yīng)的特殊蛋白質(zhì),其催化效力超過目前所有人造催化劑。ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體以后,既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性,也不改變酶本身的活性。因此ELISA具有準(zhǔn)確性高、檢測時間短、價格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果便于記錄和保存等優(yōu)點,適合于大批標(biāo)本的檢測,廣泛應(yīng)用于食品安全檢測、醫(yī)療檢測以及免疫實驗分析等領(lǐng)域。  
    酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)原理:
    1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;
    2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
    3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關(guān)鍵的作用,常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶,堿性磷酸酯酶等,其中尤以辣根過氧化物酶為多。酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物,它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應(yīng),還能催化酶促反應(yīng),顯示出生物放大作用。

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