流動(dòng)相不過濾

由于灰塵或任何其他雜質(zhì)顆粒會(huì)磨損柱塞、密封圈、氣缸體和單向閥，所以移動(dòng)相中的任何固體顆粒都應(yīng)提前清除。流動(dòng)相在玻璃容器中蒸餾，常用的方法是過濾。可使用微孔過濾器（0.2μm或0.45μm）泵的入口應(yīng)連接到砂濾棒(或片)上*過濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。

使用后沒有及時(shí)清洗泵

流動(dòng)相不得含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖劑的流動(dòng)相不得留在泵中，特別是在泵停止過夜或更長的情況下如果含有緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至僅僅由于溶液的靜止位置，都有可能析出細(xì)小的鹽晶體，這些鹽晶體會(huì)作為上述固體顆粒損壞密封圈和柱塞因此，需要泵純水以*清潔泵，并用適合色譜柱保存和泵維護(hù)的溶劑（甲醇或甲醇-水用于反相粘結(jié)硅膠固定相）進(jìn)行更換。

流動(dòng)相走空

泵工作時(shí)注意防止溶劑瓶內(nèi)流動(dòng)相用盡否則空泵運(yùn)行時(shí)也會(huì)磨損柱塞、氣缸或密封圈終產(chǎn)生泄漏。

如果沒有流動(dòng)相位流出和壓力指令怎么辦？

泵里可能有大量的氣體。此時(shí)，可以打開減壓閥，使泵以大流量（如5ml/min）運(yùn)轉(zhuǎn)，排出氣泡。也可以在泵出口使用50ml注射器幫助抽取氣體另一個(gè)可能的原因是密封圈磨損了，需要更換。

壓力和流量不穩(wěn)了？

原因可能是氣泡，需要消除；也可能是止回閥內(nèi)有異物，可以清除并浸入丙酮中進(jìn)行超聲波清洗。有時(shí)在砂濾棒中可能存在氣泡，或者被鹽或繁殖微生物的細(xì)顆粒堵塞，當(dāng)可以通過超聲去泡去除和浸沒在流動(dòng)相中的砂過濾器棒時(shí)，或者可以將砂過濾棒浸入稀酸(例如4mol/L硝酸)中，以快速除去微生物，或者在立即清洗之前溶解鹽。

壓力為啥過高或過低？

可能是管路堵塞，需要清洗壓力較低的原因可能是管道泄漏逐段檢查堵塞或泄漏情況。

在梯度洗脫中，由于多種溶劑的混合和組成的變化，有一些特殊的問題需要充分注意：

在液相色譜儀中，復(fù)雜樣品采用梯度洗脫在同一分析循環(huán)中，流動(dòng)相的濃度比按一定的步驟不斷變化，稱為梯度洗脫。因此，根據(jù)合適的容量因子K，可以很好地分離出復(fù)雜樣品中不同性質(zhì)的組分。

梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時(shí)引起基線漂移。）

梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)

注意溶劑的混溶性，不混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相有些溶劑可按一定比例混溶，超出范圍不能混溶，使用時(shí)應(yīng)注意。當(dāng)混合有機(jī)溶劑和緩沖劑時(shí)，鹽晶體也可以沉淀，特別是當(dāng)使用磷酸鹽時(shí)。

忽略的空白梯度洗脫

梯度洗脫所用溶劑的純度較高，以確保良好的重現(xiàn)性樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以識(shí)別溶劑雜質(zhì)峰，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)在色譜柱富集后將被強(qiáng)溶劑洗脫用于梯度洗脫的溶劑需要*脫氣，以防止在混合時(shí)氣泡。

忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化

混合溶劑的粘度往往隨組成的變化而變化，因此在梯度洗脫過程中壓力往往會(huì)發(fā)生變化。例如，甲醇和水的粘度較小。當(dāng)它們以相同的比例混合時(shí)，粘度增加很多。此時(shí)，柱壓約為流動(dòng)相甲醇或水的兩倍因此，應(yīng)注意防止梯度洗脫過程中的壓力超過*或色譜柱承受的大壓力。