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貨號	FS-X9885

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Hoechst33342/PI細胞凋亡染色試劑盒

英文名稱：

產品規格：100T

貨號：FS-X9885

產品介紹:

用途：

流式細胞術檢測細胞凋亡與細胞壞死

注意事項：

Hoechst33258能被活細胞攝取，與DNA結合，在紫外線下呈藍色熒光。PI使死細胞著色產生紅色熒光。在散點圖上結果為：正常細胞呈低藍/紅光，凋亡細胞呈高藍/低紅光，壞死細胞呈低藍/高紅光。

儲存條件：-20℃，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

波羅的海萊茵海默氏菌頂體前體蛋白抗體Human MBIP 小鼠中性粒彈性蛋白(NE)免疫試劑盒

擬莖點霉黑色瘤缺失樣蛋白1抗體Human MARS 小鼠脂氧A4(LXA4)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌未知糖基化轉移AER61抗體Human MARVELD2 小鼠脂聯(ADP)免疫試劑盒

副豬嗜血桿菌鐵蛋白Fe65抗體Human MAEA 小鼠脂肪合成(FASN)免疫試劑盒

貪噬菌屬抑癌基因ras同源家族1抗體Human MARVELD3 小鼠脂多糖/內(LPS)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌轉錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體Human MAGEA10 小鼠脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒

釀酒酵母心鈉抗體Human MAGEA1 小鼠脂蛋白相關磷脂A2(Lp-PLA2)免疫試劑盒

黑曲霉酰tRNA合成2抗體Human MAGEA11 小鼠脂蛋白α(Lp-α)免疫試劑盒

冬菇絲抑制蛋白激C底物抗體Human MAGEA3(Melanoma-associated antigen 3) 小鼠正常T表達和分泌因子(RANTES/CCL5)免疫試劑盒

木糖葡糖醋桿菌*核突觸蛋白α抗體Human MAGEA4 小鼠整合αM(Itgam/CD11b)免疫試劑盒

食紅球菌自噬相關蛋白4B抗體Human MAGEA6 小鼠整合α-IIb(Itga2b/CD41)免疫試劑盒

嗜線蟲致病桿菌整合樣金屬蛋白與凝血1型-12抗體Human MAGEA8 小鼠整合α5(Itgax/CD11c)免疫試劑盒

果生鏈核盤菌α-輔肌動蛋白4(內參)抗體Human MAGEB1 小鼠粘蛋白/粘液7(MUC7)免疫試劑盒

裂褶菌堿性磷抗體Human MAGI1 小鼠粘蛋白/粘液5B(MUC5B)免疫試劑盒

棒彎孢AU1 tag標簽抗體Human MAGIX 小鼠粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC) 免疫試劑盒

Phoma medicaginis var. medicaginis脂肪增強結合蛋白1Human MAGEB18 小鼠粘蛋白/粘液2(MUC2)免疫試劑盒

糙皮側耳Pleurotus│ostreatus 質量規格：15U/mg,進口表達于SiSo系的受體結合型腫瘤抗原試劑盒2-O-乙酰山椒子烯

型副傷門菌Salmonella│paratyphi A 質量規格：>98%,進分變腎上腺試劑盒柚皮-7-O-葡萄糖

IFO14056資源名稱: 印度斯坦鏈異壁菌質量規格：>99%,AR鞭毛蛋白試劑盒茵芋堿
Hoechst33342/PI細胞凋亡染色試劑盒虎皮粘蓋牛肝 2-氨基-3-甲基-5-吡啶產幽門螺桿抗體IGG

枯草芽孢桿乙酰酮化鈰(III) 水合物二酰

松針散斑殼醋己定琥珀酰

枯草芽孢桿 4-氟-2-(三氟甲基)溴芐傷寒IgM抗體

大腸埃希氏異丁香蘭酯跨膜蛋白97

嚙蝕艾肯氏 5-溴-2-間二甲苯絲酮氨基轉移

星孢鏈霉 2,5-二肉桂胖

大腸埃希氏桿 4-甲基噻唑-5-甲乙酯;4-甲基-5-乙氧羰基噻唑脂肪因子

凝結芽孢桿 D-焦谷叔丁酯1,3-

蘇云金芽孢桿 1-Boc-2-羥甲基哌1,2-

枯草芽孢桿 5-苯并噻吩核糖核L

產氨棒桿 1-溴-4-異丁基苯甲血清白蛋白結合物

釀酒酵母 3-苯甲酰內皮受體A

紅球 D-葡糖-gamma-內酯酮內皮受體B

挪威假絲酵母 4-異基芐Tafazzin蛋白
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)