ASD人雄烯二酮ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 返回列表頁(yè)

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類(lèi)型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等

ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢(xún)服務(wù)！

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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)
Escherichia│coli 致病性大腸埃希菌Escherichia│coli凍干物安全等級(jí):2模式菌株:noCM0051生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Clostridium thermocellum 熱纖梭菌Clostridium thermocellum凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no嗜熱嚴(yán)格厭氧纖維素分解菌PYC培養(yǎng)基:Casein peptone (tryptic digest) 5.0 g,Peptone 5.0 g,Yeast extract 10.0 g,Cellulose 10.0 g,濾紙條/濾紙漿 適量 ,Distilled war 1.0 L,pH 7.5生長(zhǎng)條件:55℃，嚴(yán)格厭氧生長(zhǎng)特性革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，形成芽孢，厭氧生長(zhǎng)。存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度：97%

Trames versicolor 云芝栓孔菌（斜面）Trames versicolor斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no云芝多糖,分解木質(zhì)素, 蛋白酶綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3.0g，七鎂 1.5g，葡萄糖 20.0g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:25℃，好氧存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法 純度：AR

Acidithiobacillus│sp. 硫桿狀菌Acidithiobacillus│sp.分離基物:生物除臭塔凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no氧化亞鐵硫桿菌伴生菌24生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；定期移植法 純度：AR

Shigella│dysenriae 痢疾志賀菌Shigella│dysenriae凍干物安全等級(jí):3模式菌株:no主要用于分類(lèi)學(xué)研究2生長(zhǎng)條件:37℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：≥98.0% (GC)

Rhodococcus erythropolis 紅城紅球菌Rhodococcus erythropolis凍干物安全等級(jí):1模式菌株:; produces 3-keto-delta-1,4 sroids; prodYGC培養(yǎng)基:蛋白胨 10.0 g，酵母提取物 5.0 g，葡萄糖 1.0 g，瓊脂 15.0 g,蒸餾1.0 L，pH 6.8-7.0生長(zhǎng)條件:30℃，好氧存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度：98%

Wickerhamiella│domercqiae 擬威克酵母Wickerhamiella│domercqiae分離基物:污凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no表面活性劑——槐糖脂419生長(zhǎng)條件:30℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;定期移植法 純度：98%

Devosia│sp. 德沃斯氏菌Devosia│sp.分離基物:土壤凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no820生長(zhǎng)條件:30℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法 純度：98%
ASD人雄烯二酮ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理Megsin  絲氨蛋白酶抑制劑B7抗體N-（2）-L-氨酰-L-谷氨酰胺1,5-萘二磺，四水Human HSP-60/HSPD1 (Heat Shock Protein 60) ELISA Kit

Melamine  三聚胺抗體去羥肌苷1,5-萘二磺，四水Human HSP-70 (Heat Shock Protein 70) ELISA Kit

Melamine  三聚胺抗體琥珀酰明膠脒基硫脲Human HSP-90 (Heat Shock Protein 90) ELISA Kit

Melan-A/MART-1/Melanoma HMB45  黑色素瘤相關(guān)抗原/黑色素-A抗體L-谷氨酰胺脒基硫脲Human HSP gp96 (Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit

MEK1/MAPKK1/MEKK1  MEK1/MAPKK1抗體(N-端)還原型谷胱甘肽脒基硫脲Human HSF2 (Heat Shock Tranion Factor 2) ELISA Kit

Menin/Men1  Menin抑癌蛋白抗體胸腺嘧DalcetrapibHuman HSF1 (Heat Shock Tranion Factor 1) ELISA Kit

Metal ion transporter  擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體環(huán)磷腺苷WHI-P154Human PSG1/SP1 (Pregnancy Specific Beta-1-Glycoprotein 1) ELISA Kit

Mfn1  線(xiàn)粒體融合蛋白1抗體單磷阿糖腺苷L-谷氨-15NHuman LZM (Lysozyme) ELISA Kit