DHT人雙氫睪酮ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 返回列表頁

ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
Salmonella│heidelberg 海德爾堡沙門氏菌Salmonella│heidelberg凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no1,4,5,12　r　1,2CM0051生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Salmonella│abony 阿邦尼沙門氏菌Salmonella│abony凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no1,4,12,27　b　e,n,xCM0051生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：99%

Salmonella│typhi-suis var.voldagsen 豬傷寒沙門氏菌武達(dá)森變種Salmonella│typhi-suis var.voldagsen凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no6,7　c　1,5CM0051生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：99%

Salmonella│potsdam 波茨坦沙門氏菌Salmonella│potsdam凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no6,7　l,v　e,n,z15CM0051生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：99%

Salmonella│muenchen 慕尼黑沙門氏菌Salmonella│muenchen凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no6,8　d　1,2CM0051生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：99%

Salmonella│rostock 羅斯托克沙門氏菌Salmonella│rostock凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no1,9,12　g,p,u　-CM0051生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Salmonella│moscow 莫斯科沙門氏菌Salmonella│moscow凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no9,12　g,q　-CM0051生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Salmonella│daressalaam 達(dá)累斯薩拉姆沙門氏菌Salmonella│daressalaam凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no1,9,12　l,w　e,n,xCM0051生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：97%
DHT人雙氫睪酮ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理LIR-8/CD85c/LILRB5  白免疫球蛋白樣受體8抗體美他環(huán)素2,4-吡二羧Human P-PKC (Phospho Protein Kinase C) ELISA Kit

LIS1  無腦回的致病基因LIS1抗體頭孢呋辛酯2,4-吡二羧Human pIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit of NF Kappa B Alpha) ELISA Kit

LILRB3/CD85a/PirB  白免疫球蛋白樣受體-B抗體頭孢地尼硫氫化，水合Human pERK ( Phospho Extracellular Signal Regulated Kinase) ELISA Kit

LIX1  LIX1抗體頭孢克肟亞鉑Human A-CoA (Acetyl Coenzyme A) ELISA Kit

Livin  凋亡抑制蛋白抗體美羅培南亞鉑Human PI3K (Phosphoinositide-3-Kinase) ELISA Kit

phospho-LKB1(Thr363)  磷化絲氨/蘇氨蛋白激酶抗體氨曲南2-溴異丁酰溴Human PGM (Phosphoglucomutase) ELISA Kit

phospho-LKB1(Ser334)  磷化絲氨/蘇氨蛋白激酶抗體頭孢米諾2-溴異丁酰溴Human PCK1 (Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1) ELISA Kit

phospho-LKB1(Ser428)  磷化絲氨/蘇氨蛋白激酶抗體鹽阿霉素2-溴異丁酰溴Human PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)