IL-6人白介素6ELISA試劑盒實驗原理 返回列表頁

ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在檢測過程中除正常反應外，有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：
①標本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作，必能得出準確的實驗結果，可提供免費技術咨詢服務！

公司“質量是企業是生命之源”，選購優勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿，細胞培養上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等
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樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（2）血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
（5）培養細胞
檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
Thermoactinomyces│sp. 高溫放線菌屬Thermoactinomyces│sp.分離基物:高溫大曲曲塊凍干物安全等級:1904生長條件:55℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Hafnia│alvei 蜂房哈夫尼菌Hafnia│alvei凍干物安全等級:1模式菌株:no測定賴氨。CM0180生長條件:28-30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Bacillus mucilaginosus 膠凍樣芽孢桿菌Bacillus mucilaginosus凍干物安全等級:1模式菌株:no細菌肥料營養肉汁瓊脂： 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾 1.0L，pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:30℃，好氧存儲條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Sphingomonas sanxanigenens 胞外多聚物鞘氨醇單胞菌Sphingomonas sanxanigenens形態菌體呈球狀至桿狀，單個、成對或呈短鏈狀排列，革蘭氏陰性。凍干物安全等級:1模式菌株:no黃原膠。CM0002生長條件:30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Gibberella fujikuroi 藤倉赤霉Gibberella fujikuroi凍干物安全等級:1模式菌株:no產赤霉素。綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3g，鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長條件:28℃，好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：98%

Lactobacillus│sanfrancisco 舊金山乳桿菌Lactobacillus│sanfrancisco分離基物:稀奶油凍干物安全等級:1模式菌株:noCM0006生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Lactobacillus│paracasei subsp. paracasei 副干酪乳桿菌副干酪亞種Lactobacillus│paracasei subsp. paracasei分離基物:益生菌品凍干物安全等級:1模式菌株:no發酵乳CM0006生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度：98%

Vibrio│mimicus 擬態弧菌Vibrio│mimicus凍干物安全等級:1模式菌株:no研究、質量控制。CM0002生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度：99%
IL-6人白介素6ELISA試劑盒實驗原理羅斯-孟加拉霉素瓊脂人肝臟裂解物2,6-二-3-吡CCR-2/5(CC chemokine receptor 2/5)  CC趨化因子受體2/5抗原

DEV nutrient agar for microbiology DEV營養瓊脂人肝臟星形裂解物2,6-二-3-吡CCL1/TCA3/I-309  嗜粒趨化蛋白CCL1抗原

DEV nutrient gelatin DEV營養明膠人心臟微血管內皮裂解物1,3-二溴-5-苯CCL5/RANTES(regulated on activation normal T cell expressed and secreted)  活化T表達和分泌的調節因子抗原

DEV tryptophan broth DEV色氨肉湯人主動脈內皮裂解物1,3-二溴-5-苯CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta)  巨噬炎性蛋白1β抗原

Dextrose casein-peptone agar 葡萄糖酪蛋白瓊脂人主動脈平滑肌裂解物3-甲氧基氮雜環丁烷鹽鹽MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha)  巨噬炎性蛋白3α抗原

DHL agar acc.to SAKAZAKI 甲基吡硫化氫乳糖瓊脂人心肌裂解物3-甲氧基氮雜環丁烷鹽鹽CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12)  單核趨化蛋白5抗原

DIASALM acc.to VAN NETTEN and VAN der ZEE DIASALM培養基人心肌-裂解物3-甲氧基氮雜環丁烷鹽鹽CCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14)  嗜粒趨化蛋白14抗原

DCA agar acc.to Weenk et al 梭狀芽孢桿菌鑒別瓊脂人心臟成纖維裂解物四正辛基溴化銨ABCD-1/CCL22  嗜粒趨化蛋白22抗原
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準