HRGP人羥脯氨酸糖蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 返回列表頁(yè)

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等

ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)！

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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)
Marinobacrium│georgiense 喬治亞海桿菌Marinobacrium│georgiense分離基物:沉積物/TVG淺黃色鈣質(zhì)軟泥凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no潛在的生物轉(zhuǎn)化微生物/分離自含硫代鈉培養(yǎng)基:（硫氧化微生物）471生長(zhǎng)條件:25℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：97%

Marinovum│algicola 棲藻海卵菌Marinovum│algicola分離基物:樣/多管上覆凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no大洋細(xì)菌471生長(zhǎng)條件:25℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Bacillus│badius 栗褐芽孢桿菌Bacillus│badius分離基物:沉積物/深灰色沉積物凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)淀酶菌株471生長(zhǎng)條件:15℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Colwellia│aestuarii 河口科爾韋爾氏菌Colwellia│aestuarii分離基物:沉積物/深灰色沉積物凍干物模式菌株:no產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)蛋白酶、淀酶菌株821生長(zhǎng)條件:15℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：97%

Cellulosimicrobium│funkei 芬克纖維微菌Cellulosimicrobium│funkei分離基物:生物樣/赤棕魚/魚腸道內(nèi)容物凍干物模式菌株:no共生微生物/赤棕魚腸道共生菌；產(chǎn)酶微生物/蛋白酶471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：97%

Pseudomonas│peli 爛泥假單胞菌Pseudomonas│peli分離基物:生物樣/軟珊瑚凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌，用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌；產(chǎn)酶微生物/脂酶（三丁甘油酯）.471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Aurantimonas│manganoxydans 橙色單胞菌（加詞待譯）Aurantimonas│manganoxydans分離基物:生物樣/軟珊瑚凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌，用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌；產(chǎn)酶微生物/脂酶（三丁甘油酯）.471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：≤0.5% (war)

Pseudoalromonas│undina 蛹假交替單胞菌Pseudoalromonas│undina分離基物:生物樣/軟珊瑚凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌，用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌 產(chǎn)酶微生物/脂酶（三丁甘油酯）471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法 純度：97%
HRGP人羥脯氨酸糖蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理Phospho-HDAC4(Ser632)/HDAC5(Ser498)/HDAC7(Ser486)  磷化組蛋白去乙酰化酶4、5、7抗體化矢車菊素6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉 鹽鹽Human SSADH (Succinate-semialdehyde dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit

PKN2  蛋白激酶N2抗體5-羥色胺5-溴基異萘Human POSTN/OSF-2 (Periostin) ELISA Kit  

RKIP  Raf激酶抑制蛋白抗體亥茅酚苷5-溴基異萘Human MMP-15 (Matrix Metalloproteinase 15) ELISA Kit

PKR  蛋白激酶R抗體異鼠李素-3-O-新橙皮苷5-溴基異萘Human MMP-14 (Matrix Metalloproteinase 14) ELISA Kit

Phospho-PKR (Thr446)  磷化蛋白激酶R抗體紫蓳靈(S)-(+)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺Human VLDL (Very Low Density Lipoprotein) ELISA Kit

Phospho-PKR (Thr451)  磷化蛋白激酶R抗體高麗槐素(S)-(+)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺Human LCAT (Lecithin-Cholesterol Acyltransferase) ELISA Kit

Phospho-PKR (Thr446/451)  磷化蛋白激酶R抗體秦皮苷(S)-(+)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺Human CYP2E1 (Cytochrome P450, family 2, subfamily E, polypeptide 1) ELISA Kit

AKT2  蛋白激酶B2奇任2-氨基茚滿鹽鹽Human UCRP (Ubiquitin Cross Reactive Protein) ELISA Kit