豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽elisa試劑盒的操作程序

豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽elisa試劑盒的操作程序：

1.　包被：用包被液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為0.5～20μg／ml，按100ul/孔加入酶標(biāo)板，  4℃包被過夜。

2.　洗板：次日棄去孔內(nèi)液體，在紙巾上輕輕扣打以吸去殘留液體，加入洗滌液（約280-300ul/孔），漂洗2-3次，每次3-5min；

3.  封閉：按200-250ul/孔加入封閉液，室溫2-3小時(shí)或37℃1-2小時(shí)，也可4℃封閉過夜，然后棄去孔內(nèi)封閉液；

4.  樣品處理：用洗滌液或樣品稀釋液將待檢樣品(含未知抗原)稀釋至所需濃度； 

5.　標(biāo)準(zhǔn)液：用洗滌液或樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至所需濃度（定性分析可省略本步驟）；

6.　加樣：按排列順序依次加入50-100ul/孔稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)液、處理過的待檢樣品、陰性對照及陽性對照，室溫或37℃孵育30-60min；

7.  洗板：同步驟2；豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒 

8.　加酶標(biāo)抗體：酶標(biāo)抗體的稀釋按產(chǎn)品說明書，按50-100ul/孔加入新鮮配制的酶標(biāo)抗體，室溫或37℃孵育1小時(shí)；

9.  洗板：同步驟2；  

10. 加底物液顯色：按100-150ul/孔加入新配制的TMB底物溶液，室溫避光反應(yīng)15～30分鐘。

11. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入50ul的終止液。

12. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用裸眼觀察結(jié)果，豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可在酶標(biāo)儀上于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處測OD值。檢測時(shí)以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若樣品孔中的OD值大于陰性對照孔的2.1倍，即為陽性。