小鼠抗紅細胞抗體elisa試劑盒樣本處理及要求和操作步驟

小鼠抗紅細胞抗體elisa試劑盒  樣本處理及要求：

1.  血清：室溫血液自然凝固  10-20  分鐘，離心  20  分鐘左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2.  血漿：應根據標本的要求選擇  EDTA  或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合  10-20  分鐘后，離心 20  分鐘左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3.  尿液：用無菌管收集，離心  20  分鐘左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.  細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心  20  分鐘左右（2000-3000

轉/分）  。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用  PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到  100  萬/ml  左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心  20  分鐘左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5.  組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的  PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保

存備用。標本融化后仍然保持  2-8℃的溫度。加入一定量的  PBS（PH7.4）  ，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心  20  分鐘左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6.  標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7.  不能檢測含  NaN3  的樣品，因  NaN3  抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠抗紅細胞抗體elisa試劑盒   操作步驟：

1. 標準品：其濃度為160IU/L（貯液)。先將其稀釋為160IU/L(標準曲線高濃度)后，再準備5個稀釋標準品的EP管，每個EP 管中加入150μL 的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成160IU/L，80IU/L，40IU/L，20IU/L，10IU/L，5IU/L，標準品稀釋液(0IU/L)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液

Tube

0

1

2

3

4

5

IU/L

160IU/L

80IU/L

40IU/L

20IU/L

10IU/L

5IU/L

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）  、待

測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液  40μ l，然后再加待測樣品  10μ l（樣品終稀釋度為  5  倍）   。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置  37℃溫育  30  分鐘。

4.  配液：將  20  倍濃縮洗滌液用蒸餾水  20  倍稀釋后備用。

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置  30  秒后棄去，

如此重復  5  次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑  50μ l，空白孔除外。

7.  溫育：操作同  3。

8.  洗滌：操作同  5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑  A50μ l，再加入顯色劑  B50μ l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15  分鐘.

10.  終止：每孔加終止液  50μ l，終止反應（此時藍色立轉黃色）  。

11.  測定：以空白空調零，450nm  波長依序測量各孔的吸光度（OD  值）  。 測定應

在加終止液后  15  分鐘以內進行。

注意事項：

1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡  15-30  分鐘后方可使用，酶標包被板開封后

如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在  5  分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本  OD

值大于標準品孔孔的  OD  值）  ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n  倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）  。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．  底物請避光保存。

7．  嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．  所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．  本試劑不同批號組分不得混用。