人腦紅蛋白 ELISA試劑盒關(guān)鍵步驟和樣本處理及要求

人腦紅蛋白 ELISA試劑盒

ELISA關(guān)鍵步驟為以下幾點:
1、盡量用八道或者十二道移液器加樣。對于相同的試劑，經(jīng)如二抗，酶，顯色液，終止液等。
2、自己的樣品，因為每一孔的樣品不一樣，用排槍加有些麻煩，如果一次的樣品比較少，而自己加樣又比較快，可以一個孔一個孔的加，但如果想一次把96或者48T的做完，可以先擺好一些PCR管或者準備一個96孔細胞培養(yǎng)板。將自己的樣品先加到PCR管或者培養(yǎng)板中（此板間距與酶板板相同）。記得加一定的余量，如一次加樣是50ul，可以先加70ul。加完后再用排槍加樣，這樣可以縮短加樣時間，減小每個孔間的時間誤差。
3、如果有多余的孔，標準品孔可以做復孔，在自己的樣品前加一次標準品，加完樣品后再加一次標準品。如果孔不夠，那么可以將標準品放在樣品中間加。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。