收到產品后的使用說明

收到產品后請嚴格按照以下要求進行操作：

1.客戶在收到瓶裝細胞后，先觀察培養瓶是否完好，培養液是否外滲，培養液是否混濁，若出現破裂、滲液、培養液混濁等問題，請在收到細胞后的當天與我們的銷售或技shu支cai聯xi，我們會及時處理(聯xi方式詳見頁腳)。

2.細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿新鮮的*培養液(內含細胞培養的血清含量和雙抗)，封好瓶口是我們正常運輸細胞的方法。細胞出庫前都是處于無菌狀態，并且生長良好，我們也會對出庫細胞進行拍照留檔。（建議客戶在收到我們的細胞時將培養液拍張照片，觀察培養液的顏色以及是否漏液，觀察細胞時請拍100X、200X 各2-3 張照片進行留存，方便后期細胞狀態的對比，拍攝的照片應當清晰。）

3.客戶在收到貼壁瓶裝細胞后不開封，先將培養瓶外表面用75%酒精擦拭干凈， 鏡檢細胞貼壁情況。若貼壁良好，請將細胞整瓶放于培養箱穩定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請將培養瓶瓶口再次消毒、過火，再將多余培養液抽出進行繼續培養，或直接進行

細胞傳代(消化、傳代步驟詳見細胞使用說明書)；若貼壁細胞有部分細胞懸浮，請先將細胞整瓶放于培養箱穩定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請將培養瓶瓶口再次消毒、過火，將培養液抽出，依次離心(1000rmp 5min)將懸浮細胞收集后放回原瓶進行過夜培養，并次日觀察貼壁情況。如細胞仍不能貼壁， 請用臺盼藍染色鑒定細胞活力，證實細胞無活力，請將細胞拍照(多倍數多視野) 及染色照片發送至技shu支chi的郵xiang，我們會盡快處理。(以上僅為貼壁細胞處理方法)。

4.客戶在收到懸浮瓶裝細胞后不開封，先將培養瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細胞狀態。若狀態良好，請將細胞整瓶放于培養箱穩定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請將培養瓶瓶口再次消毒、過火，將整瓶細胞懸液分別離心(1000rmp 5min)后收集于離心管中，視其離心后的細胞量進行放回培養或分瓶培養。(以上僅為懸浮細胞處理方法)。

5.客戶在收到半懸浮瓶裝細胞后不開封，先將培養瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細胞狀態。若狀態良好，請將細胞整瓶放于培養箱穩定1-2H 后拿出，瓶蓋開啟前請將培養瓶瓶口再次消毒、過火， 將整瓶細胞懸液中的上層懸浮細胞離心(1000rmp 5min)

后收集于離心管中，重懸細胞后放回原瓶與貼壁細胞共同培養至傳代。重懸上層懸浮細胞時必須保持下層貼壁細胞的營養條件，防止貼壁細胞缺乏營養。(以上僅為半懸浮細胞處理方法)。

6.若客戶收到1.8ml 離心管常溫細胞，收到細胞后觀察是否管裂、漏液、污染， 若有以上任何一種現象，請立即拍照后聯xi我men。若無以上現象，請用75% 酒精對離心管進行消毒后放到操作臺內，嚴格無菌操作，過火打開管蓋，將管中的血清細胞輕輕吹

打幾下， 取出后放入15ml 離心管中， 加入雙倍或3 倍的*培養液1000rmp/5min離心，棄上清重懸后與對應的*培養液混勻，加入到培養瓶中過夜培養，第二天觀察細胞狀態和密度。若密度未達85%則繼續培養， 若達85%以上則可直接進行傳代。

收到細胞過夜培養24h 后發現細胞污染或者狀態不佳，必須在發現問題的當天即刻向我們銷售人員反饋。(以上僅為血清運輸細胞處理方法)。

7.若客戶收到凍存管細胞，請盡快復蘇。復蘇方法：1、37°水浴晃動直至融化（不要超過一分鐘），移至15ml 離心管，另加入3-5 倍*培養液，1000rmp

5min，棄上清，放入25cm2 瓶中培養，第二天拍照留存有效信息。2、37°水浴晃動直至融化（不要超過一分鐘），直接放進加有6-8ml 培養基的25cm2 瓶中培養，16 小時之后必須換液并拍照留存有效信息。

8.傳代注意事項
胰酶消化的過程至關重要。消化過度細胞會粘連拉絲，嚴重影響細胞活性和后期狀態；消化不*則細胞難以從瓶壁自行脫落，反復對細胞表面進行吹打會損傷細胞活性，導致細胞后期狀態差、增值能力低下以及細胞形態發生改變。影響消化的因素有很多，主

要包括胰酶溶液的活性（配置條件、低溫保存時間長短、是否反復凍融，解凍后的存放時間及溫度等）、消化細胞時的溫度（建議在37°培養箱中消化）、胰酶所加的量（以T25 為例，一個T25 加1ml 胰酶）、細胞的密度（同株細胞不同密度下胰酶對細胞的消化時間也不同，密度稀消化時間快，密度大消化時間相對較慢）等。不同細胞對胰酶的敏感性也不同，對于新購買的細胞，建議客

戶用含0.25EDTA 的胰酶消化液先培養箱持續消化1-2min，鏡下觀察細胞是否變圓，直至細胞*脫落或者輕拍瓶壁*脫落。記錄*佳消化時間， 下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。

9.客戶收到細胞時無異常，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如貼壁細胞密度未超過85%則繼續培養，超過85%時，請按照細胞使用說明書進行傳代培養；如為懸浮細胞和半懸浮細胞，具體操作請按照細胞使用說明書進行操作。

10.我們公司認為細胞購買者或使用者均有細胞培養經驗，客戶收到細胞，原瓶里的培養液可以重新收集使用（僅適用于近距離運輸的客戶）。在次消化傳瓶時，我們建議客戶留部分細胞繼續使用我們的培養液進行培養，另外一部分細胞客戶可使用自

己的培養液培養，這樣可減少由于細胞不適應培養環境而導致的細胞培養問題，并且能對細胞的培養環境做出對比。如果兩組細胞的生長速度和細胞狀態無明顯變化，客戶可繼續培養擴增，如果兩組細胞在生長速度和細胞狀態上有微妙或明顯的變化，那么我們建議客戶需要更換更好的血清培養細胞。