ELISA試驗洗滌參數與次數介紹

 ELISA 即酶聯免疫吸附測定，是一類常用的免疫酶技術。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，然后利用酶標記（偶聯）的抗體或抗原與之孵育，加入顯色劑顯色，通過酶標儀測定待測物顏色與標準物顏色的差異，繪制出酶活曲線得出待測物濃度。優化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。

1、洗滌參數
主要的參數是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌量必須相同。
江萊生物ELISA試劑盒的使用手冊中列出包被量。我們建議使用350µl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個反應孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
2、洗滌次數
影響洗滌效果的主要參數是洗滌循環的量。當然，洗滌次數越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會降低信號強度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌三次。不過，一般而言，包被平板需要的洗滌次數比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板，必須優化洗滌次數。
控制洗滌量和洗滌次數的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說，96孔板的每個孔能容納330至460 µl。不過，有些自動化洗板機可設置程序，分配遠遠超出這個量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其實很簡單，就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術能增加洗滌量，但不會溢出到其他孔中。