ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗常見類型特點

     ELISA實驗就是酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是將抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，利用抗原抗體的特異性結(jié)合以及抗體或者抗原上標(biāo)記的酶催化特定底物發(fā)生顯色反應(yīng)，實現(xiàn)目標(biāo)物檢測的免疫分析方法，可測至皮摩爾（pmol）級別。

ELISA常見類型：

直接法：

將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上，然后加入稀釋好的特異性的酶標(biāo)抗體，孵育后加入底物顯色并判讀結(jié)果。

特點：

適用于檢測小分子抗原，優(yōu)勢：實驗步驟少，檢測速度快，無須使用二抗可避免交互反應(yīng)，結(jié)果較準(zhǔn)確。缺點：每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實驗靈活性低，靈敏度低。

間接法：

將已知抗原連接在固相載體上，待測抗體與抗原結(jié)合后再與酶標(biāo)二抗結(jié)合，形成抗原一待測抗體-酶標(biāo)二抗的復(fù)合物，復(fù)合物的形成量與待測抗體量成正比，屬非競爭性反應(yīng)類型。

特點：

常用于抗體的檢測，只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。優(yōu)勢：二抗可以加強(qiáng)信號，而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標(biāo)記的一級抗體則能保留它多的免疫反應(yīng)性。缺點：可能會發(fā)生交叉反應(yīng)，與直接法比，實驗周期長。

夾心法：

類型：分為直接夾心和間接夾心。檢測抗體是酶標(biāo)抗體，則可稱為直接夾心ELISA；檢測抗體不帶有標(biāo)記，則還需要使用酶標(biāo)二抗與檢測抗體結(jié)合，這種稱為間接夾心ELISA。

直接夾心又分為雙抗體夾心和雙抗原夾心。夾心ELISA實驗需要用到配對抗體（捕獲抗體和檢測抗體），原理：將捕獲抗體結(jié)合到ELISA板上，通過捕獲抗體固定抗原，隨后通過直接或間接ELISA的方式進(jìn)行檢測。在夾心ELISA實驗中，最重要的是對配對抗體進(jìn)行驗證，確保配對抗體能同時與抗原結(jié)合，以確保實驗的順利進(jìn)行。

特點：

常用于抗原測定，適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，不適用于測定半抗原及小分子單價抗原。優(yōu)點：高靈敏、高專一性，抗原無須事先純化。缺點：抗原一定得擁有兩個以上的抗體結(jié)合部位。

競爭法：

首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液；而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。這種方法所測定的抗原只要有一個結(jié)合部位即可。

特點：

常測定小分子抗原：如激素和藥物之類，也可以用來檢測大分子抗原物質(zhì)甚至是抗體。檢測大分子抗原物質(zhì)時，由于空間位阻的影響，使得該檢測方法沒有雙抗體夾心法檢測大分子抗原物質(zhì)靈敏度高。優(yōu)勢：可適用不純的樣本，快速高效。 缺點：整體的敏感性和專一性都較差。