復蘇細胞收到后收集指南

復蘇細胞收到后收集指南：

1、請按照說明書提前準備好基礎培養基、血清、因子、雙抗，不要隨意更改培養條件，提前將生物安全柜進行酒精消毒和紫外滅菌。

2、 收到細胞后，若發現培養瓶破損、漏液、培養基渾濁或污染，請拍照后及時聯系我們。

3、 細胞在37℃培養箱中靜置2-3小時，在倒置顯微鏡下確認細胞狀態，給細胞（100倍×2張，200倍×2張）以及培養瓶（外觀×1張）拍照留存，售后時肯定需要提供。

4、 瓶內充液培養基（運輸培養基）不能再用來培養細胞，需按照說明書上的培養條件配制新鮮全培養基培養細胞。

5、鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，收集全部充液培養基，250g離心5分鐘，棄去培養瓶中充液培養基，用新鮮配制的全培養基重懸未貼壁的細胞，將細胞鋪瓶至新的T25細胞培養瓶，補齊全培養基至6mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，立刻對細胞進行傳代處理。

注：在快遞運送過程中細胞因振動會造成脫落現象，不論繼續培養還是傳代，未貼壁的細胞均需離心回收。

6、收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前3代建議均采用1:2傳代，若細胞明顯達到對數期，1:2傳代后第二天就長滿，則可提高傳代比例，采用1:3傳代，前面代次建議代代保種，以妨出現問題后無種可用。

7、 由于細胞在運輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸，收到細胞進行傳代后，建議前3-5代培養條件可適當提高血清含量以促進恢復細胞原有狀態并縮短到達對數期的時間。

8、 市面上血清魚龍混雜，假血清（BSA或替代物冒充血清）、劣質血清（小牛冒充胎牛）、水貨（國產冒充進口）屢見不鮮，若客戶培養細胞過程中明顯感覺細胞生長速度不及預期，且無法更換血清，建議酌情提高血清含量來彌補血清質量的缺陷，以期提高細胞生長速度。

9、實驗結束后，將臺子內的細胞放回培養箱，試劑放回冰箱，最后噴灑Deeming實驗室安全衛士，預防微生物污染，關閉生物安全柜，打開紫外滅菌30分鐘以上。