單克隆抗體的性質(zhì)鑒定方法

     當(dāng)獲得多個雜交瘤細(xì)胞株時，要了解哪一株是zui適用的，則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有：

    （一）Ig類型測定

    通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行測定，確定其Ig類型或Ig亞類型別。

    （二）特異性測定

    把與相應(yīng)抗原有關(guān)的物質(zhì)同McAb進(jìn)行多種免疫學(xué)檢測，鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應(yīng)用的可靠性。

    （三）抗體效價測定

    效價以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示，稀釋度越高，則抗體效價也越高。在凝集反應(yīng)中，腹腔積液效價可達(dá)5萬以上；在ELISA中，腹腔積液效價可達(dá)100萬以上。如ELISA效價低于10萬，用于診斷測定將不會達(dá)到很高的敏感度，應(yīng)重新制備。

    （四）表位測定

    通過雙向瓊脂擴(kuò)散法，把兩種McAb混合，加入于同一孔中，對孔放相應(yīng)的抗原，如出現(xiàn)兩條沉淀線可證明兩者為抗不同表位的McAb；利用ELISA雙抗夾心法，將一種McAb作包被抗體，另一作酶標(biāo)記，其中加入抗原，如顯色，則證明兩者抗不同的表位。

    （五）親和力測定

    只有當(dāng)抗原與抗體結(jié)合部位結(jié)構(gòu)wan全吻合時，抗體的親和力。這種結(jié)合力以抗原抗體反應(yīng)平衡時，抗原與抗體濃度的乘積與抗原抗體復(fù)合物濃度之比表示。如親和力太低，會嚴(yán)重影響測定的敏感性。

    （六）染色體分析

    正常鼠的脾細(xì)胞染色體數(shù)：40，全部為端著絲粒；小鼠骨髓瘤細(xì)胞染色體：SP2／0細(xì)胞為62—68，NS-1為54～64。大多數(shù)為非整倍性，有中部和亞中部著絲點。雜交瘤細(xì)胞的染色體數(shù)目接近兩親本細(xì)胞染色體數(shù)目的總和，在結(jié)構(gòu)上多數(shù)為端著絲粒染色體外．還應(yīng)出現(xiàn)少數(shù)標(biāo)志染色體。染色體數(shù)目多且較集中的雜交瘤細(xì)胞分泌高效價的抗體。