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    小鼠胚胎成骨細胞前體細胞原代培養

    時間:2023/3/20閱讀:302
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    小鼠胚胎成骨細胞前體細胞原代培養:

    1、取約500mg脂肪組織(自外科手術患者的皮下獲取),再將脂肪組織一次擠壓進入準備好的15m離心管中,每個離心管中的組織不超過5ml。

    2、吸取緩沖液PBS7ml加入到上述裝有組織的離心管中,用吸管吹打10~20次,然后靜置1min左右,用吸管將組織下層的液體吸出。如此反復直到所吸出的液體呈透明狀,不帶有血細胞為止。

    3、向有的試管中加入與組織量相同大約5ml左右的消化液(yi酶0.25%,I型膠原酶0.1%以1:1比例混合配制而成),將試管密封,放入37°C恒溫搖床中,190r/min,震蕩消化30min。此時液面分為3層,上層為黃色油狀脂肪細胞層,中層為脂肪組織層,下層為含單個核細胞的液體;

    4、吸出離心管中的下層液體移入含*培養基(含10%胎牛血清的高糖DMEM)的新離心管中終止消化,然后將離心管封閉,1500rpm離心10min。

    5、用吸管吸取上清后去掉,加入1ml培養基,輕輕吹打10~20次制成細胞懸液,將各個離心管中的胞懸液收集起來,接種待用。

    6、在剩余脂肪中加入新的yi酶和膠原酶,重復以上步驟繼續消化,重復2-3次,將收集到的有核細胞按照一定的密度接種到培養瓶中,放入37°C、5%?CO2培養箱培養;

    7、次換液:大約12-24小時后,觀察細胞貼壁即可進行次換液,此后每隔3天換液,待細胞生長至融合后進行傳代。


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