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    PCR反應條件的控制
    
						
    
							時間：2022/10/17閱讀：584
							
    
							
				
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    PCR反應條件的控制：

    1.  PCR反應的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子 。 

    2.  鎂離子濃度 總量應比dNTPs的濃度高，常用1.5 mmol/L。
    　　
    3.  底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200 umol/L。
    　
    4.  TaqDNA聚合酶2.5U(100 ul）。
    　　
    5.  引物 濃度一般為0.1 ～0.5 umol/L。
    　
    6.  反應溫度

    （1）變性溫度和時間95℃，30 s。

    （2）退火溫度和時間 低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。

    （3）延伸溫度和時間72℃，1 min/kb(10 kb內）。

    （4）Tm值=4(G+C) +2(A+T)

    7.  循環次數 ：一般為25 ～30次。循環數決定PCR擴增的產量。模板初始濃度低，可增加循環數以便達到有效的 擴增量。但循環數并不是可以無限增加的。一般循環數為30個左右，循環數超過30個以后，DNA聚合酶活性逐漸達到飽和，產物的量不再隨循環數的增加而增加，出現了所謂的“平臺期"。

    
							
							
							
						
    
					
    
				
    
			
    
		
    
		
		
		
		 



  
    
    				
			

		
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    

    

     
     
     
	 




	 
	
	
	

    
	
    
		
    
			
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