ELISA試劑盒實驗需要重點注意點

       ELISA試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測，自從60-70年代問世以來，得到 quan 世界科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。為了保證ELISA試劑盒實驗質量，我們需要掌握一些小技巧以助于實驗的成功，在實驗操作的過程中，我們除了需要多點細心之外，還有一些需要重點注意的方面：

　　1：檢驗技師

　　應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結和分析問題的能力，對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。

　　2：校對

　　使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。

　　3：仔細閱讀說明書

　　嚴格按照說明書要求進行規范化操作。ELISA試劑盒不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進。

　　4：洗滌

　　洗板不*，酶結合物本底顯色會呈現假陽性。洗滌液要新鮮，現用現配，陳舊的洗滌液會出現本底增高現象，也可能出現假陽性。

　　5：反應時間

　　反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合，生成物結構松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。　

　   6：保存期

　　注意ELISA試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。

　　7：試劑的實用性

　　試劑的穩定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。

　　8：掌握顯色時間

　　顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結合物的量過少，易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結果。

　　9：加樣

　　如果加樣不準確，酶生成物的量不能確定，ELISA試劑盒直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。