PCR檢測試劑盒基本原理及結構組成

PCR檢測試劑盒基本原理：

通過大量對比某一種細菌或病毒的基因，得到該細菌或病毒共同保守序列，根據該序列設計特異性引物，通過PCR擴增，即可獲得相應大小的片段，以此來檢測該細菌或者病毒的感染/污染狀態(tài)。

PCR檢測試劑盒結構組成：

①    10mM dNTP；

②    5×Taq 聚合酶buffer(包含引物F和R)；

③    Taq 聚合酶；

④    陽性對照DNA；

⑤    陰性對照DNA；

⑥    加樣緩沖液；

⑦    滅菌超純水。

⑧    常規(guī)PCR檢測試劑盒說明書。

PCR檢測試劑盒操作流程如下：

（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

（2）酶標板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

（4）陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。

（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。