白介素elisa試劑盒一種高靈敏的電化學發光免疫檢測方法

白介素elisa試劑盒一種高靈敏的電化學發光免疫檢測方法
新研究發現：利用elisa技術以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測對象，建立了一種高靈敏的電化學發光免疫檢測方法。
相思子毒素電化學發光檢測原理：a. 多抗; b. 相思子毒素; c. 生物素化單抗; d. 三聯吡啶釕; e. 鏈霉親和素包被的磁性微球 
傳統的磁免疫電化學發光(ECL)檢測方法是將磁微球用作捕獲抗體的載體，利用其較大的反應面積及順磁性來實現對檢測物的快速結合與分離。由于單個抗體分子用作標記探針時表面可修飾的基團有限，在靶標濃度很低時，標記探針數量很少，很難檢測到，這影響到靈敏度的進一步提高。
本研究將酶聯免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)在酶標板上進行的抗體包被、封閉、抗原結合、二抗結合等程序化的操作步驟與磁微球作為標記探針載體的優勢相結合，以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測對象，建立了一種高靈敏的電化學發光免疫檢測方法。實驗過程如圖所示，首先在酶標板上吸附固定相思子毒素多抗，與相思子毒素作用后再與生物素化的單抗結合，形成雙抗體夾心免疫復合物，然后通過生物素-鏈霉親和素特異相互作用連接三聯吡啶釕標記的親和素包被磁性微球形成磁性微球免疫復合物。將復合物從酶標板上解離后進行電化學發光檢測。
這樣，結合于酶標板的磁微球的量即可反映Abrin 的濃度，且磁微球表面攜帶大量標記物，可放大檢測信號，提高檢測的靈敏度。利用此方法檢測相思子毒素，濃度在2-200 ng/ L 范圍內與電化學發光強度呈良好的對數線性關系，檢測限達2 ng/ L。該方法靈敏度較傳統方法提高兩個數量級，也遠高于目前國內外已報道的方法。該法特異性高、重現性好，可用于痕量蛋白的高靈敏檢測，在臨床診斷、環境監測、生物防護等領域有較好的應用前景。
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