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檢測
辣根過氧化物酶 (HRP) 和堿性磷酸酶 (ALP) 是 ELISA 分析中使用*泛的兩種酶。
要考慮到某些生物材料具有高水平的內源酶活性（例如肺泡細胞中的高水平 ALP、紅細胞中的高水平過氧化物酶），這可能會導致非特異性信號。如有必要，用左旋咪唑（針對 ALP）或用 0.3% H2O2 的甲醇溶液（針對過氧化物酶）進行另外的阻斷處理。
ALP 底物
對硝基苯磷酸鹽 (pNPP) 是大多數應用中廣泛使用的底物。在室溫下孵育 15-30 分鐘后，在 405 nm 處測定硝基苯酚呈現的黃色，加入等體積的 0.75 M NaOH 可終止反應。
HRP 顯色液
HRP 的底物為過氧化氫。過氧化氫的裂解與氫供體的氧化偶聯，反應期間氫供體的氧化使顏色發生變化。
TMB（3,3',5,5'-四甲基聯苯胺）
每孔添加 TMB 溶液，孵育 15–30 分鐘，添加等體積的終止液 (2 M H2SO4)，然后在 450 nm 處讀取光密度。
OPD（鄰苯二胺2鹽酸鹽）
在 492 nm 處測定終產物。底物對光敏感，應避光保存。
ABTS（2,2'-聯氮-雙-[3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸]二銨鹽）
終產物為綠色，可在 416 nm 處測定光密度。
某些酶底物被認為是有害的（潛在致癌物），因此始終要小心處理并佩戴手套。
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