微生物培養在不同培養基中的操作步驟！

           微生物培養在不同培養基中的操作步驟！

微生物培養在不同培養基中的操作步驟！

一、目的要求

1．了解不同微生物培養在斜面上和液體、半固體培養基中的特征。

2．進一步熟練和掌握微生物的無菌操作接種技術。

二、基本原理

微生物的培養特征是指微生物培養在培養基上所表現出的群體形態和生長情況。一般可用斜面、液體和半固體培養基來檢驗不同微生物的培養特征。它們培養在斜面培養基上，可以呈絲線狀、刺毛狀、串珠狀、疏展狀、樹枝狀或假根狀（圖Ⅶ-6）。生長在液體培養基內，可以呈混濁、絮狀、粘液狀、形成菌膜、上層清晰而底部顯沉淀狀。穿刺培養在半固體培養基中，可以沿接種線向四周蔓延；或僅沿線生長；也可上層生長得好，甚至連成一片，底部很少生長；或底部長得好，上層甚至不生長。利用微生物的培養特征，可以作為它們的種類鑒定和識別純培養是否污染的參考。

檢驗微生物的培養特征，或進行其他微生物學實驗時，接種過程必須保證不被其他微生物所污染，為此，除工作環境要求盡可能地避免或減少雜菌污染外，熟練地掌握各種無菌操作接種技術是很重要的。

三、器材

枯草芽孢桿菌，大腸桿菌(Escherichia coli)，，白地霉（Geo-trichum candidum），蕈狀芽孢桿菌（Bacillusmycoides），（粘質賽氏桿菌， Serratia marcescens）；肉膏蛋白胨斜面培養基，肉膏蛋白胨液體培養基，半固體肉膏蛋白胨培養基，接種環，接種針，無菌吸管，酒精燈等。

四、操作步驟

1．斜面接種

（1）在肉膏蛋白胨斜面試管上，用記號筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。

（2）點燃酒精燈或煤氣燈。

（3）將菌種試管和待接種的斜面試管，用大拇指和食指、中指、無名指握在左手中，并將中指夾在兩試管之間，使斜面向上，成水平狀態，如圖Ⅶ-7。在火焰邊用右手松動試管塞，以利于接種時拔出。

（4）右手拿接種環通過火焰燒灼滅菌（參照實驗一），在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無名指分別夾持棉塞（或試管帽），將其取出，并迅速燒灼管口。

（5）將滅菌的接種環伸入菌種試管內，先將環接觸試管內壁或未長菌的培養基，達到冷卻的目的，然后再挑取少許菌苔。將接種環退出菌種試管，迅速伸入待接種的斜面試管，用環在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線，勿將培養基劃破，也不要使環接觸管壁或管口。

（6）接種環退出斜面試管，再用火焰燒管口，并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環逐漸接近火焰，再燒灼。如果接種環上沾的菌體較多時，應先將環在火焰邊烤干，然后燒灼，以免未燒死的菌種飛濺出污染環境，接種病原菌時更要注意此點。

2．液體培養基接種

向肉膏蛋白胨液體培養基中接種少量菌體時，其操作步驟基本與斜面接種時相同，不同之處是挑取菌體的接種環放入液體培養基后，應在液體表面處的管內壁上輕輕磨擦，使菌體從環上脫落，混進液體培養基，塞好試管塞后，搖動液體，使菌體在液體中分布均勻，或用試管振蕩器混勻。

向液體培養基中接種量大或要求定量接種時，可將無菌水或液體培養基注入菌種試管，用接種環將菌苔刮下，再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液體培養基。如果菌種為液體培養物，則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養基。整個接種過程都要求無菌操作。

3．穿刺接種

用接種針挑取菌種（針必須挺直），自培養基的中心垂直地刺入半固體培養基中，直至接近管底，但不要穿透，然后沿原穿刺線將針拔出，塞上試管塞，燒灼接種針，如圖Ⅶ-9所示。

上述幾種接種法的無菌操作，凡未敘述的均按實驗一操作。試驗者應反復練習無菌操作接種技術，直至較熟練地掌握。

4．將已接種的斜面、液體和半固體培養基放置28—30℃溫箱，培養2—3天后取出觀察結果。

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