食品中幾種致病菌的快速檢測方法！
食品中幾種致病菌的快速檢測方法！
沙門氏菌、大腸桿菌O157等致病菌對食品安全造成很大的危害，能否快速、準確地檢測出這些致病菌，是確保食品安全的首要任務。常規致病菌檢測方法包括增菌、菌落分離及多種生化試驗和血清學鑒定試驗，其檢測結果雖然準確可靠，但檢測過程較長，且步驟煩瑣，難以適應現代食品生產與流通的要求，也不能滿足HACCP等食品質量安全可知體系的需求。
隨著生物、化學、材料科學及計算機領域的發展，新的快速檢測和識別方法層出不窮，這些方法包括DNA檢測方法、酶聯免疫分析(ELISA)、抗原一抗體檢測以及常規檢測的改進方法。這些病原菌快速檢測方法的優點是能從大量食品檢樣中快速篩選出某種致病菌或毒素。
以下介紹幾種致病菌的快速檢測方法。
1．沙門氏菌
(1)免疫學方法該法包括AOAC993. 08方法《食品中沙門氏菌單克隆酶免疫比色檢測方法》、AOAC989. 14方法《食品中沙門氏菌多克隆酶免疫色度分析篩選方法(TECRA沙門氏菌色度免疫分析方法)》、AOAC992.11方法《食品中沙門氏菌單克隆酶免疫分析和比色篩選法》和AOAC996. 08方法食品中沙門氏菌酶聯免疫分析初篩方法分析》。
(2)分子生物學方法 該法包括D＼A探針檢測法和聚合酶鏈反應(PCR)技術。DNA探針技術是發展起來的一項特異、靈敏、快速的檢測方法，特別適合于直接檢出致病性微生物，而不受非致病性微生物的影響；PCR技術是由美國于1980年創建，該法已廣泛應用于致病性微生物的診斷。目前，已有全自動化的PCR檢測試劑盒及儀器，如美國杜邦快立康公司的BAX病原菌檢測系統。
(3)自動化傳導法該法是通過儀器檢測電導（或電阻抗）的改變來確定是否存在被檢微生物。
2．大腸桿菌O157: H7
(1)鑒別性培養基法及顯色培養基法 根據大腸桿菌O157: H7某些生化特征設計的一些選擇性培養基，在這些培養基上E．coli O157: H7顯示出特殊的顏色以與其他的大腸桿菌或雜菌區分開。目前，E．coLi O157: H7培養基有法國梅里埃公司的“O157 ID”和法國科瑪嘉的“E．coli O157: H7顯色培養基”。
(2)免疫學檢測方法該法是利用抗原抗體反應建立起來的一系列檢測方法。這類方法操作簡便、靈敏度高，因此在對E．coli O157: H7的檢測中得到多的應用研究。
(3)分子生物學方法 該法包括DNA探針檢測法和聚合酶鏈反應(PCR)技術。
3．*
(1)鑒別培養基法 以法國生物梅里埃公司的“Baird-Parker培養基”和科瑪嘉的“*顯色培養基”為典型代表。
(2)快速測試紙片法簡稱紙片法。典型代表是美國3M公司研制生產的Petrifilm*測試片，這是一種薄膜型的計數平板，是一種無需耗時準備培養基的快速檢驗系統。測試薄膜由檢測片和反應片兩部分組成。檢測片含有改良的Baird-Parker培養基成分及冷水可溶性凝膠，對于*的生長具有很強的選擇性，并能將其鑒定出來。反應片含有DNA、甲苯胺藍及四唑顯色劑，該顯色劑有助于菌落的計數和確定葡萄球菌耐熱核酸酶的存在。
*在測試片上顯色為暗紫紅色菌落，若檢測片的菌落均呈暗紫紅色，則無需再做進一步的確認。此即為確認的結果，測試即已完成。如果在測試片上有其他可疑的菌落出現，則可以使用*反應片來辨認是否為*。除了暗紫紅色的菌落之外，若檢測片出現其他顏色的菌落（黑色或藍綠色）時，必須使用反應片。
*會產生脫氧核糖核酸酶(DNase)，而此酶可與反應片上的顯色劑反應形成粉紅色環，故當確認反應片置入測試片中，*（少數情況下會是豬葡萄球菌及中間葡萄球菌）會形成粉紅色環，其他種類的細菌則不會形成粉紅色環。在葡萄球菌屬中，呈凝集酶反應陽性的菌絕大多數是*、豬葡萄球菌與中間葡萄球菌。
(3)乳膠凝集試驗法*表面存在A蛋白，具有種屬特異性，該A蛋白能與人及多種哺乳動物的免疫球蛋白IgG的Fe段結合，因此可采用IgG包埋的乳膠顆粒，結合血漿纖維蛋白原與凝集因子的凝集反應，來檢測*。作為免疫學方法之一，乳膠凝集試驗在*的檢測分析中，既可作為初篩，同時也是確認*的方法之一。
(4) DNA探針法該方法的原理是將已知的DN斷上加上可識別的標記（如32p同位素標記、熒光素標記）制作成DNA探針，這樣就可以用來檢測樣品是否具有其互補的序列。該法的典型代表是法國生物梅里埃公司的GEN-PROBE系統。大多數檢測葡萄球菌的探針是針對腸毒素的。它們能同編碼腸毒素有關的基因序列雜交，這類探針能檢測腸毒素A、B、C和E。
(5)酶聯免疫技術該法利用mini-Vidas全自動免疫分析儀。它是應用酶聯免疫技術，用熒光分析技術通過固相吸附器，用已知抗體來捕捉目標生物體，然后以帶熒光的酶聯抗體再次結合，經充分沖洗，通過激發光源檢測，即能自動讀出發光的陽性標本，其優點是檢測靈敏度高、速度快，可在48h的時間內快速篩選鑒定出*及*腸毒素。
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