冷凍干燥菌種的轉(zhuǎn)接技術(shù)！

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冷凍干燥菌種的轉(zhuǎn)接技術(shù)！

建議用下列方法恢復(fù)培養(yǎng)冷凍干燥保藏的菌種。

一、安瓶管開封

1．用浸過70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。

2．用火焰將安瓿管頂端加熱。

3．滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。

4．用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。

二、菌株恢復(fù)培養(yǎng)

1．用無菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。

2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi)，然后在建議的溫度下培養(yǎng)。

3．若未能活化，或活化后有疑問時，請于收到菌種1個月內(nèi)，通知保藏中心，經(jīng)查證無誤后，即免費補寄。

三、注意事項

1．菌種活化前，請將安瓿管保存在6一10的環(huán)境下。

2．厭氧菌的培養(yǎng)，如無特別說明，自開封至接種完成，均需以無氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)。

3．某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，此時請將步驟二(2)重復(fù)一次。

四、液氮超低溫保藏程序

1、容器的選擇：使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。

2、檢查安培瓶是否滲漏：用0.05%的亞甲基藍水溶液在4浸泡30-45分鐘，沖洗干凈，棄去含有藍色染料的安培瓶，其余的安培瓶備用。

3、打印標簽(激光打印)。

4、容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶，再用蒸餾水在滅菌鍋中121浸泡滅菌15分鐘，干燥并將打印好的標簽放入安培瓶中，略擰緊螺旋蓋，再行121滅菌30分鐘。

5、保藏菌菌齡：處于大生長量階段或?qū)?shù)生*后期。

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