細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X97104 |
商品屬性：
名稱 小鼠外周血白細胞 2.組織來源：外周血 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠外周血白細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。白細胞（Leukocyte），舊稱白血球，血液中的一類細胞。根據(jù)白細胞的細胞質內有無特殊顆粒，可將其分為有粒白細胞和無粒白細胞。前者常簡稱為粒細胞，根據(jù)其特殊顆粒的染色特性，又分為中性粒細胞、嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞，白細胞也通常被稱為免疫細胞。在顯微鏡下可以看到，血細胞中體積比較大、數(shù)量比較少，具有細胞核；其主要作用是吞噬細菌、防御疾病。 5.方法簡介： ()實驗室分離的小鼠外周血白細胞采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的小鼠外周血白細胞經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M025 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細胞形態(tài)圓形 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
營養(yǎng)V-B培養(yǎng)基（底層） 英文名稱：minimum Nutritional V-B Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
乙酰胺瓊脂 英文名稱：Acetamide Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
豬單核細胞增多性李斯特菌素O((LLO)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
小鼠化蛋白激B(P-PKB)免疫試劑盒*直銷
小鼠c-fos 免疫試劑盒*直銷
山羊免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
人氧化Ⅵα亞基多肽1(COX6A1)免疫試劑盒*直銷
白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)免疫試劑盒*直銷
人甲狀腺ows\system32\EhStorShell.dll
小鼠外周血白細胞Rhizoma atractylodis蒼術染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Neurexin 2 軸突蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1ml
Babesia trautmanni豬巴貝斯蟲 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周T2R38/TAS2R38 味覺受器蛋白T2R38抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-human IgG/APC APC標記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Aspergillus ochraceus赭曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PMP2 周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlMAL/MPV17 T淋巴細胞成熟相關蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Flos mume梅花探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-PRKAA2(Ser173) 苷單磷酸活化蛋白激α2抗體 規(guī)格: 0.1mlMARCH1 膜相關環(huán)指蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
ESBL-Klebsiella pneumoniae超廣譜β-內酰胺肺炎克雷伯LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周L-Citrulline L-瓜抗體 規(guī)格: 0.2mgABHD13 水解結構域蛋白13抗體 規(guī)格: 0.2ml
Acinetobacter baumannii鮑氏不動桿（鮑曼不動桿）探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FAST kinase Fas活化的絲/蘇激抗體 規(guī)格: 0.1mlUBE2A/UBE2B/RAD6 泛素結合E2蛋白A抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix aristolochiae fangchi廣防己LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-LSP1 (Ser252) 磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlHIF3 alpha 缺氧誘導因子3α/HIF-3α抗體 規(guī)格: 0.1ml
Trypanosoma congolense剛果錐蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CT DNA(calf thymus DNA) 小牛胸DNA抗體 規(guī)格: 0.2ml
Kudoa septempunctata七星庫道蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Endoconcha sepiae海螵蛸LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周FRMD5 FRMD5蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
