細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
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產品名稱 | |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X96794 |
商品屬性：
名稱 CCC-SMC-1 (兔主動脈平滑肌細胞) 組織來源主動脈 生長特性貼壁細胞 細胞形態多角形 背景描述CCC-SMC-1細胞是利用2月齡大耳白兔胸腹主動脈，去除內皮，剝離外膜，進行原代培養而來的細胞；經a-SMA鑒定純度，連續培養可傳代15次以上。 生長培養基DMEM＋15% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
小鼠 PRLR / Prolactin receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 LYVE1 / LYVE-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 SCN3B 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 CANT1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 CLEC10A / MGL1 / CD301 人細胞裂解液 (陽
CCC-SMC-1 (兔主動脈平滑肌細胞)0.25mL ATP溶液，100mM ATP Solution -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Casein kinase II subunit beta
1瓶 SK-MEL-5株 SK-MEL-5 低溫運輸和保存5號膽鹽進口、國產Bile salt 525克BR，70%
2 ug pLVX-DsRed-Express2-C1 pLVX-DsRed-Express2-C1 低溫運輸，-20℃保存
2 ug pNTAP- B pNTAP- B 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人血紅素氧合1(HO-1)ELISA試劑盒
2 ug pOTB7 NFKBIL2 pOTB7 NFKBIL2 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL 人白三烯C4合成(LTC4 synthase)ELISA試劑盒
25mL Bovine Serum Albumin Solution（BSA溶液），20mg/mL Bovine Serum Albumin Solution，20mg/mL 常溫保存 78-5000 pg/mL 人5-羥色胺受體1B(5-HT1B)ELISA試劑盒
50uL 電泳級SYBR Green I SYBR GreenⅠ, EG -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Fumarate hydratase, mitochondrial
卵黃瓊脂基礎 Egg Yolk Agar Base 250g 31.2-2000 pg/mL 瘧原蟲(Pm)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
100 mg Calcein Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1.56-100 ng/mL 人α-甲基酰基消旋（AMACR）ELISA試劑盒
250U 核酸內切 V Endonuclease V -20℃保存 3.12-200 U/L ELISA Kit for Human Agouti-related protein
100mg 膠原Ⅲ型 Collagenase Type Ⅲ 4℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Glycoprotein hormones alpha chain
