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產品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96538 |
商品屬性：
名稱 ST (豬睪丸細胞) 別稱Swine Testis; STOMA24; Stoma 24; ST-IOWA; ATCC-ST 種屬野豬 年齡（性別）80-90日齡 組織來源睪丸 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述ST細胞是由Mcclurkin·A· W等人于1960年建系。ST細胞一般用于病毒增殖和分離，是豬細小病毒的理想宿主；ST細胞可用于這類病毒的分離及增殖。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基MEMMEM(PM150467 )(ATCC改良)(PM150467 )＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~30-40小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) Matrix protein 1 / M1 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體), 無標簽
人 FAM20B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
人 IL36G / IL1F9 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
人 GMFB 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 CD120a / TNFRI 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 NR2F6 基因全長ORF克隆 (表達
ST (豬睪丸細胞)250mL SDS Solution（SDS溶液）,10% SDS Solution,10% 常溫保存 31.2-2000 pg/mL 人血管動蛋白(AMOT)ELISA試劑盒
固氮菌用阿須貝氏培養(yǎng)基 Nitrogen-fixing bacteria with the A Sugai’s medium 250g 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Vascular endothelial growth factor D
假單胞CFC選擇性培養(yǎng)基添加劑(凍干) 1ml*5 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Platelet glycoprotein V
劉榮標氏鞭毛染色液 5ml*8 0.156-10 ng/mL 人圍脂滴蛋白1(Perilipin-1)ELISA試劑盒
100mL 超級雜交液B（含甲酰胺） SuperHyb Solution -20℃保存
2 ug pORF-HSV1tk pORF-HSV1tk 低溫運輸，-20℃保存高鹽察氏瓊脂 進口、國產Salt Czapek Dox Agar用于霉菌和酵母菌的計數(shù)(GB標準)250
2 ug pQE-40 pQE-40 低溫運輸，-20℃保存NTM 培養(yǎng)基進口、國產NTM Medium用于淋球菌的分離培養(yǎng)(Quelab方法)250
1瓶 LA795(實體瘤)株 LA795(實體瘤) 低溫運輸和保存 1.56-100 ng/mL 人精液凝固蛋白1(Semenogelin-1)ELISA試劑盒
TTC營養(yǎng)瓊脂 TTC Nutrient Agar 250g 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Platelet glycoprotein Ib alpha chain
100mL Bicine Buffer，0.5M,pH8.0 Bicine Buffer，0.5M,pH8.0 常溫保存丙二酸鹽發(fā)酵管進口、國產丙二酸鹽發(fā)酵管20支BR
100mL 瓊脂糖凝膠 2B Sepharose 2B 4-8℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Fibrillin-1
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
