操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96754 |
商品屬性：
名稱 SF767 (腦瘤細胞) 別稱SF-767; SF 767 年齡（性別）66歲 組織來源腦組織 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)多角形 生長培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~29-36 hours 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 IL4R / Il4ra 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 LTBR / TNFRSF3 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Contactin 5 / CNTN5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 FLRT2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Syndecan-4 / SDC4 人細胞裂解液 (陽性對照
SF767 (腦瘤細胞)2 ug pVL1393 pVL1393 低溫運輸，-20℃保存
1瓶 NCI-H2087株 NCI-H2087 低溫運輸和保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Inositol monophosphatase 1
梭菌強化培養(yǎng)基 Reinforced medium for clostridia 250g 0.625-40 ng/mL 無形體核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
1瓶 A-673株 A-673 低溫運輸和保存 1.56-100 mIU/L ELISA Kit for Human Insulin
250mL Tris-Acetate Buffer,1M,pH7.0 Tris-Acetate Buffer,1M,pH7.0 常溫保存 1.56-100 ng/mL 人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒
100g 酸性品紅 Fuchsin Acid 室溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Granulysin
10L Tricine-SDS-PAGE陽極電泳液（干粉） Tricine-SDS-PAGE Cathod Buffer 常溫保存 0.312-20 ng/mL 人蛋白活化受體4(PAR-4)ELISA試劑盒
1mL APMSF溶液，10mg/mL APMSF Solution -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Endothelial cell-specific molecule 1
25g QAE 葡聚糖凝膠 A-50 QAE-Sephadex A-50 室溫保存 0.156-10 ng/mL 人熱休克因子4 (hHSF4)ELISA試劑盒
OF生化管 20支
500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.0 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.0 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人質(zhì)組氨酰(Histidyl-tRNA synthetase, cytoplasmic) ELISA試劑盒
