細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
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產品名稱 | |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X96870 |
商品屬性：
名稱 NIT-1 (小鼠胰島素瘤β細胞) 年齡（性別）10周齡 組織來源胰腺/朗格漢斯胰島 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 生物安全等級2 生長培養基Ham's F-12K＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:3 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
人 LCN1 / VEGP / Lipocalin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 MANF / ARMET 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 CDH5 / Cadherin-5 / CD144 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CEACAM1 / CD66a 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 AGER / RAGE 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 CRTAM 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 LRP1 / A2MR / CD91 (aa 786
NIT-1 (小鼠胰島素瘤β細胞)0.1mL×10 DH5α化學感受態 DH5α Competent Cell -80℃保存 3.12-200 U/mL ELISA Kit for Human Cytosolic phospholipase A2
1次 96孔板病毒DNAout(離心法) 96 Microwell Plate Viral DNAOUT 常溫 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Antigen KI-67
2 ug pMT21 pMT21 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人Disabled同源物1(DAB1)ELISA試劑盒
2 ug pMD2G pMD2G 低溫運輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Alpha-synuclein
2 ug pFLD-cat A+ pFLD-cat A+ 低溫運輸，-20℃保存
50L 超快核酸電泳液干粉 SuperBuffer-2 常溫 93.75-6000 pg/mL 人原2(F2)ELISA試劑盒
改良馬丁瓊脂培養基顆粒 Martin Agar Medium, Modified 250g 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Histo-blood group ABO system transferase
2 ug pTet-On advanced pTet-On advanced 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Lysophosphatidylcholine acyltransferase 2
0.5mL dCTP溶液，100mM dCTP Solution -20℃保存 0.625-40 ng/ml ELISA Kit for Human Pleckstrin homology domain-containing family O member 1
1瓶 CCC-SMC-1株 CCC-SMC-1 低溫運輸和保存 7.8-500 pg/mL 人線粒體肽蛋亞砜還原(MSRA)ELISA試劑盒
1瓶 SGC-7901/DDP株 SGC-7901/DDP 低溫運輸和保存 0.156-10 U/mL ELISA Kit for Human Beta-glucuronidase
