?樣品要求及注意事項：
1、 如果提供實驗材料，實驗材料必須保證新鮮，請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑，并用干冰運輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ，也可以將樣品研磨后放在 Trigol中，動植物組織 ： 50～100mg/mlTrigol，貼壁細(xì)胞：10cm2/mlTrigol，懸浮細(xì)胞：5×106動植物，酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進(jìn)行評估。
4、 實時熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。
停乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
產(chǎn)品名稱 | 停乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Streptococcus dysgalactiae |
貨號 | CP914863 |
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，產(chǎn)品僅用于科研請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
相對定量簡介：
分析方法： ①雙標(biāo)曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡介
公式：
優(yōu)點：分析簡單，實驗優(yōu)化簡單
缺點：對每一個基因，每一輪實驗都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線；必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線；這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實狀態(tài)應(yīng)用：基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對定量方法之一
實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
扎溴銨， 規(guī)格500g 進(jìn)口/原裝
芐索氯銨， 規(guī)格100g 進(jìn)口/原裝
芐索氯銨， 規(guī)格25g 進(jìn)口/原裝
芐索氯銨， 規(guī)格500g 進(jìn)口/原裝
3-(N， 規(guī)格N-二甲基十二烷基銨)丙烷鹽， 規(guī)格100g 進(jìn)口/原裝
3-(N， 規(guī)格N-二甲基十二烷基銨)丙烷鹽， 規(guī)格25g 進(jìn)口/原裝
3-(N， 規(guī)格N-二甲基十二烷基銨)丙烷鹽， 規(guī)格5g 進(jìn)口/原裝
十二烷基鎂， 規(guī)格25g 進(jìn)口/原裝
十二烷基鎂， 規(guī)格5g 進(jìn)口/原裝
八烷基基銨， 規(guī)格100g 進(jìn)口/原裝
八烷基基銨， 規(guī)格25g 進(jìn)口/原裝
代甜菜堿8， 規(guī)格1g 進(jìn)口/原裝
代甜菜堿8， 規(guī)格5g 進(jìn)口/原裝
代甜菜堿10， 規(guī)格1g 進(jìn)口/原裝
代甜菜堿10， 規(guī)格5g 進(jìn)口/原裝
石蠟切片膽色素史?。⊿tein）染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
冰凍切片膽色素史?。⊿tein）染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
石蠟切片膽色素格美林（Gmelin）染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
冰凍切片膽色素格美林（Gmelin）染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
細(xì)胞中性脂質(zhì)尼羅紅染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
石蠟切片中性脂質(zhì)尼羅紅間接染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次
石蠟切片中性脂質(zhì)尼羅紅直接染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
冰凍切片中性脂質(zhì)尼羅紅染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
細(xì)胞中性脂質(zhì)蘇丹黑染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
石蠟切片中性脂質(zhì)蘇丹黑間接染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：10次
停乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Myceliophthora│thermophila (Apinis) Oorschot資源名稱嗜熱側(cè)孢霉提供形式:斜面培養(yǎng)物小鼠CD30 ELISA試劑盒
Beauveria│brongniartii (Sacc.) Petch資源名稱卵孢白僵菌提供形式:斜面培養(yǎng)物小鼠MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA試劑盒
Rhizobium│sp. (Amorpha futicosa)資源名稱*紫穗槐根瘤菌分離基物:紫穗槐小鼠sEPCR ELISA試劑盒
Dictyophora│echinovolvata M. Zang D. R. Zheng & Z. X. Hu資源名稱#刺托竹蓀提供形式:斜面培養(yǎng)物小鼠ECF ELISA試劑盒
Fusarium│sp.資源名稱#鐮刀菌提供形式:斜面培養(yǎng)物小鼠Eotaxin 1/CCL11 ELISA試劑盒
Dictyophora│duplicata (Bosc) E. Fisch.資源名稱短裙竹蓀3-3分離基物:毛竹林子實體小鼠EPO ELISA試劑盒
Dictyophora│duplicata (Bosc) E. Fisch.資源名稱短裙竹蓀3-5分離基物:毛竹林子實體小鼠E-Selectin/CD62E ELISA試劑盒
