小鼠成肌細(xì)胞(C2C12)
細(xì)胞介紹
這是D.Yaffe和0.Saxe丨建立的小鼠成肌細(xì)胞株的亞克隆(由H.Blau等人構(gòu)建)。 C2C12細(xì)胞株分化很快，形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)處理，導(dǎo)致分化途徑從成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)換成成骨細(xì)胞。檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。
細(xì)胞特性
1)來源：組織：肌肉品系：C3H細(xì)胞類型：成肌細(xì)胞
2)形態(tài)：成肌細(xì)胞
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1)干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2)存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
小鼠成肌細(xì)胞(C2C12)細(xì)胞用途：僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備 DMEM 培養(yǎng)基(DMEM，GIBC0,貨號 11965-092)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
2)細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入l0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中。
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后 加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
小鼠成肌細(xì)胞(C2C12)注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們。
所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
