T25m2 人體角膜成纖維細胞提取物直銷

人體角膜成纖維細胞提取物【Human Eye: Normal Corneal Cells Derivatives】 人角膜成纖維細胞分離自正常人角膜結締組織，主要功能：（1）成纖維細胞是結締組織中最常見的一種細胞。（2）可在角膜創傷后修復組織。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。

收到凍存細胞的處理方法：
1.37°C水浴預熱培養基；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續暖細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。

實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1163719-91-2  CCT241161  1mg  Nipah Virus(NiV)尼帕病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 

1163719-91-2  CCT241161  500μg  Nipah Virus(NiV)尼帕病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 

1163719-91-2  CCT241161  5mg  Nairobi Sheep Disease Virus(NSDV)內羅畢羊病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 

116-38-1  Edrophonium (chloride)  10mM(in1mLDMSO)  Entamoeba histolytica溶組織內阿米巴探針法熒光定量PCR試劑盒 

116-38-1  Edrophonium (chloride)  1g  Entamoeba spp. 內阿米巴通用探針法熒光定量PCR試劑盒
CTSD Others Human  Cathepsin D / CTSD 細胞裂解液 (陽性對照) Ac-rC亞1酰胺單體Ac-rC Phosphoramidite質量規格：>98%,BR

DLD-1 結直腸腺癌上皮細胞Rp-腺苷 3′,5′-環單硫代1酸酯鈉鹽Rp-Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate,  Salt 質量規格：美國進口

CMVECs微血管內皮細胞 CMVECs micro vascular endothelial cells DMEM+10%FBSSp--腺苷 3′,5′-環單硫代1酸酯 三乙基銨鹽水合物Sp-Adenosine 3',5'-cyclic monophosphorothioate triethylammonium salt hydrate 質量規格：美國進口

TNFSF12 Protein Rat 重組大鼠 TNFSF12 蛋白 (Fc 標簽)2-甲基硫代二1酸腺苷2-(Methylthio)adenosine 5'-diphosphate 3 salt hydrate 質量規格：美國進口

小梁網細胞(HTMC)(5×105) 3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞 Mouse腺苷-2',3'-環1酸 三乙基銨鹽Adenosine 2',3'-Cyclic Phosphate Triethylammonium Salt 質量規格：美國進口
人體角膜成纖維細胞提取物直銷結腸平滑肌細胞(HCSMC)(5×105 ) RLF, 大鼠成纖維細胞 Rattus物質P（7-11）質量規格：>95%,BRSubstance P (7-11)

豬腎傳代細胞;IBRS-2TA-0910，他替瑞林質量規格：>95%,BRTA-0910, taltirelin

CDH13 Others Rat 大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 細胞裂解液 (陽性對照) 促甲狀腺激素釋放激素，游離酸質量規格：>95%,BRTRH, Free Acid

CL-0157MG-63(骨肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2尿皮質激素Ⅲ，小鼠質量規格：>95%,BRUrocortin III, mouse

L-M TK細胞，鼠胸腺激酶缺陷細胞株 B細胞瘤細胞系,BJAB細胞 小鼠肝癌細胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]戊基尼泊金質量規格：美國進口Pentyl Paraben
注意事項：
1.接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色
，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。