小鼠食管平滑肌細(xì)胞提取物【Mouse Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】 小鼠食管平滑肌細(xì)胞提取物是從小鼠食管平滑肌細(xì)胞提取的，小鼠食管平滑肌細(xì)胞從正常小鼠食管組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。
潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠食管平滑肌細(xì)胞提取物說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-964079 |
收到凍存細(xì)胞的處理方法：
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1151-98-0 Apigeninidin (chloride) 500μg Tannerella forsythia福賽斯坦納菌LAMP試劑盒
115199-84-3 ICI 199,441 hydrochloride 10mg Strongyloides ransomi豬類圓線蟲LAMP試劑盒
115199-84-3 ICI 199,441 hydrochloride 50mg Strongyloides papillosus乳突類圓線蟲LAMP試劑盒
1152-14-3 Resorufin Acetate 10mg Strongyloides equinus馬類圓線蟲LAMP試劑盒
1152-14-3 Resorufin Acetate 25mg Strongyloides equinus馬類圓線蟲LAMP試劑盒
IFNA8 Protein Human 重組 Ierferon alpha-B / IFNA8 蛋白 (His 標(biāo)簽)DL- 2-Phenylglycinol質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
HHCC(肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 粘質(zhì)沙雷伯氏菌甘氨酸-L-亮氨酸 Glycyl-L-leucine質(zhì)量規(guī)格：0.98
腦動脈血管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)Amberlyst 15離子交換樹脂(干)Amberlyst 15 ion-exchange resin質(zhì)量規(guī)格：干
BCCIP Others Human BRCA2 / BCCIP 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Amberlite® IRA-900 陰離子交換樹脂Amberlite® IRA-900質(zhì)量規(guī)格：
小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞;P815Amberlite® XAD16非離子型大孔樹脂(20-60 mesh)Amberlite® XAD16質(zhì)量規(guī)格：20-60 mesh
小鼠食管平滑肌細(xì)胞提取物說明SW-13(腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 MCF-7(癌細(xì)胞)曙紅Y,醇溶劑紅 43質(zhì)量規(guī)格：AREosin Y ,alcohol solution
CM-M068小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL曙紅B質(zhì)量規(guī)格：BSEosin B
CD27 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD27 / TNFRSF7 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 蘆丁/蕓香葉苷質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRRutin
小氣道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基SAEpiCM-prf蘆丁/蕓香葉苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Rutin
Hela P10s-11F細(xì)胞，細(xì)胞 小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞與大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞之融合細(xì)胞,NG108-15細(xì)胞 支氣管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)新橙皮苷二氫查爾酮質(zhì)量規(guī)格：≥95%,BRNeosperidin dihydrochalcone
注意事項：
1.接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
