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    薄層色譜的操作步驟

    2021-02-22標簽:薄層色譜

        薄層色譜操作步驟
     
        完成TLC分析通常需經制板、點樣、展開、檢出4步操作。
     
        ⑴制板
     
        在一平面支持物(通常為玻璃)上,均勻地涂制硅膠、氧化鋁或其他吸附劑薄層、樣品的分離、檢測就在此薄層色譜板上進行。
     
        一般選用適當規格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄層板規格有:10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。稱取適量硅膠,加入0.2%~0.5%羧甲基纖維素鈉溶液(CMC-Na),充分攪拌均勻,進行制板。一般來說10cm×20cm的玻璃板,3~5g硅膠/塊;硅膠與羧甲基纖維素鈉的比例一般為1:2~1:4。制好的玻璃板放于水平臺上,注意防塵。在空氣中自然干燥后,置1l0℃烘箱中烘0.5~lh,取出,放涼,并將其放于紫外光燈(254nm)下檢視,薄層板應無花斑、水印,方可備用。
     
        ⑵點樣
     
        用微量進樣器進行點樣。點樣前,先用鉛筆在層析上距末端lcm處輕輕畫一橫線,然后用毛細管吸取樣液在橫線上輕輕點樣,如果要重新點樣,一定要等前一次點樣殘余的溶劑揮發后再點樣,以免點樣斑點過大。一般斑點直徑大于2mm,不宜超過5mm.底線距基線1~2.5cm,點間距離為lcm左右,樣點與玻璃邊緣距離至少lcm,為防止邊緣效應,可將薄層板兩邊刮去1~2cm,再進行點樣。
     
        ⑶展開
     
        將點了樣的薄層板放在盛在有展開劑的展開槽中,由于毛細管作用,展開溶劑在薄層板上緩慢前進,前進至一定距離后,取出薄層板,樣品組分固移動速度不同而彼此分離。
     
        ①展開室應預飽和。為達到飽和效果,可在室中加入足夠量的展開劑;或者在壁上貼兩條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋。
     
        ②展開劑一般為兩種以上互溶的有機溶劑,并且臨用時新配為宜。
     
        ③薄層板點樣后,應待溶劑揮發完,再放人展開室中展開。
     
        ④展開應密閉,展距一般為8~15cm。薄層板放入展開室時,展開劑不能沒過樣點。一般情況下,展開劑浸入薄層下端的高度不宜超過0.5cm。
     
        ⑤展開劑每次展開后,都需要更換,不能重復使用。
     
        ⑥展開后的薄層板用適當的方法,使溶劑揮發完全,然后進行檢視。
     
        ⑦Rf值一般控制在0.3~0.8,當Rf值很大或很小時,應適當改變流動相的比例。
     
        ⑷斑點的檢出
     
        薄層色譜展開后的薄層板經過干燥后,常用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點。對于無色組分,在用顯色劑時,顯色劑噴灑要均勻,量要適度。紫外光燈的功率越大,暗室越暗,檢出效果就越好。
     
        展開分離后,化合物在薄層板上的位置用比移值(Rf值)來表示?;衔锇唿c中心至原點的距離與溶劑前沿至原點的距離的比值就是該化合物的Rf值。
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      4.檢測方式:反射法、熒光法。重現性:≥99%
      5.算法:歸一法,內標法,外標法(一點直線法,兩

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      4、點樣寬度:小可達0.2mm;

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      6、點樣重現性:優于0.5%;
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      5、光譜帶寬:5nm、10nm、20nm可選;

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