非洲豬瘟檢測實驗方案常見故障排除方法

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　　非洲豬瘟檢測實驗方案常見故障排除方法

　　核酸提取環節故障排除

　　核酸提取量低：若提取的核酸量不足，可能影響后續檢測。首先檢查樣本采集是否規范，如采集量過少或采集部位不當，需重新采集樣本。其次，查看核酸提取試劑是否過期或保存不當，若試劑變質應更換新試劑。另外，提取過程中操作時間、溫度等參數未按要求執行，也會導致提取量低，需嚴格按照操作流程進行。

　　核酸純度差：核酸純度差可能含有雜質，影響PCR擴增。檢查提取過程中使用的試劑是否受到污染，如緩沖液中有雜質，需更換試劑。同時，注意離心操作是否充分，若離心轉速不夠或時間不足，雜質不能有效分離，應調整離心參數。

　　PCR擴增環節故障排除

　　無擴增產物：出現無擴增產物的情況，先檢查引物是否設計合理，是否存在引物二聚體或與模板不匹配的問題，可重新設計引物或驗證引物序列。其次，查看PCR反應體系中各成分是否添加準確，如Taq酶、dNTP等是否漏加或添加量不足，需重新配制反應體系。另外，檢查PCR儀的溫度設置是否正確，如變性、退火、延伸溫度和時間是否符合要求。

　　擴增產物條帶異常：若擴增產物條帶模糊、拖尾或出現非特異性條帶，可能是退火溫度不合適，可適當調整退火溫度。也有可能是Mg2?濃度過高或過低，需優化Mg2?濃度。此外，模板DNA濃度過高也會引起非特異性擴增，應適當稀釋模板。

　　電泳檢測環節故障排除

　　條帶不清晰：電泳后條帶不清晰，可能是瓊脂糖凝膠濃度不合適，對于非洲豬瘟檢測產物，應選擇合適的凝膠濃度。另外，電泳緩沖液使用次數過多或過期，會影響電泳效果，需更換新的緩沖液。

　　無條帶顯示：若電泳后無條帶顯示，檢查加樣是否準確，是否存在漏加或加樣量過少的情況。同時，查看電泳儀是否正常運行，電壓和電流是否穩定。