免疫親和層析技術(shù)

 親和層析技術(shù)是純化各種生物大分子的有效方法。zui初是將抗體作為一種結(jié)合劑用于免疫親和層析，根據(jù)抗原抗體結(jié)合后形成大量多聚體和不溶性基質(zhì)原理來收集抗原。隨后，利用抗體與惰性微珠共價(jià)交聯(lián),雖然這種反應(yīng)是一種簡單的結(jié)合，但抗體的活性因交聯(lián)缺乏定位作用或抗體的過量交聯(lián)而喪失。

通過研究發(fā)現(xiàn)，抗體與蛋白A或蛋白G微珠共價(jià)交聯(lián)后更容易與抗原結(jié)合。將具有良好抗原結(jié)合特性，且來源廣泛的各種單克隆抗體制成免疫親和層析柱，已成為一種實(shí)用和有效的純化方法。

免疫親合層析具有以下特點(diǎn)：
①抗體與其相應(yīng)抗原結(jié)合具有高度親和力和特異性,能大量分離天然狀態(tài)或近似天然狀態(tài)的S②不是所有的抗體都適用于免疫親和層析，但一旦獲得一種性能良好的抗體，純化過程就簡單、快速、可靠。
③可按照不同規(guī)模進(jìn)行，半天內(nèi)即可完成，而且可以獲得其他層析法不可比擬的純化效果。
④經(jīng)過簡單的改進(jìn)，免疫親和層析法也可用于純化針對(duì)抗原的特異性抗體。

免疫親和層析是一種既簡單又非常有效的分離抗原的技術(shù)。即將抗體共價(jià)結(jié)合到一種惰性的微珠上，然后將微珠與含有待純化抗原的溶液混合。當(dāng)抗原被交聯(lián)在微珠上的抗體捕獲后，通過洗滌去除無關(guān)的抗原，然后用洗脫緩沖液處理微珠，結(jié)合的抗原被洗脫，從而得到純化的抗原。

如果洗脫條件掌握較好而且比較溫和，純化的抗原仍能保持其天然狀態(tài)。雖然下述的所有實(shí)例都是以蛋白質(zhì)抗原作為研究對(duì)象，但凡是能與抗體有效結(jié)合的分子都能用這種方法進(jìn)行純化。

只需簡單地改變操作程序，免疫親和層析法同樣也可以用來分離經(jīng)過初步純化的抗體。此時(shí)抗原和抗體所起的作用正好相反，抗原共價(jià)交聯(lián)在微珠上，再與抗體結(jié)合，然后通過洗脫，得到純化的抗體。

在條件合適的情況下，應(yīng)用免疫親和層析法通常只需一次就可以達(dá)到1000~10000倍的純化效果。使用性能特別優(yōu)良的抗體，并且掌握好洗脫條件，也可以達(dá)到10000倍以上的純化效果。