組織均質勻漿及蛋白提取

來源：北京平利洋經貿有限公司 2013年06月14日 21:25

整個組織（或者一部分組織，比如1克，具體需要考慮組織的大小和所含藥物量及方法的檢測限），置于適當的容器中（比如試管，2ml 15ml），加入適當體積的適當溶劑（體積可采用1:2，即1g組織用2ml溶劑，至于溶劑的種類，可選擇水、甲醇、乙腈等，具體需要考慮藥物的溶解性），然后以 18000rpm的OmniPrep多樣品剪切勻漿機或 6m/s Omni Bead Ruptor 24多樣品研磨珠進行勻漿（時間大約1min），直至獲得均一的勻漿液，然后超聲5min（為充分溶出藥物，但須考慮藥物的穩定性）、3500g離心5min，分取上清液。然后按照與血漿的預處理方法繼續處理進樣測定即可。

上述操作的主要目的是將組織細胞中的藥物*溶解出來，從而能夠測定全部的藥物濃度。因此如果采用細胞破碎儀OMNI Sonic Ruptor 400和Sonic Ruptor 4000也可以。

但在操作中需要考慮藥物的穩定性。畢竟高速勻漿會產熱導致藥物降解。

勻漿時保持低溫，因為30度左右代謝酶會產生活性，可能會影響測定結果。

勻漿的目的是什么？應該是測里面的某種成分的含量或活性吧，或者其他目的。冰水浴的目的是什么？防止活性成分分解或滅活。如果你要測的東西穩定性做夠好，沒必要冰水浴

組織勻漿的時候需要在冰上操作,加蛋白酶抑制劑

盡量在冰上,溫度當然是低些,以防蛋白降解還怕尿素分解,以致于氨甲基化修飾蛋白,影響后面的質譜鑒定

控制在低溫不要連續勻漿可以每勻漿10秒就把勻漿的容器放置于冰水混合物中降溫，然后再勻漿，這樣可以減少對目的物的損傷

操作步驟：參照《蛋白質技術手冊》
1、用*或*迅速將清洗的組織分離成適宜的小塊，如1cm^3
2、每體積濕重組織通常加3~5倍體積預冷的勻漿緩沖液至勻漿容器內
3、制備勻漿：1）手動的玻璃勻漿器勻漿10－20次。2）剪切式組織勻漿均質以10000－28000rpm的速度，高速勻漿3次，每次10秒，次間暫停幾秒。3） 24多樣品研磨珠均質儀以線速度6.5m/s，高速勻漿3次，每次15秒，次間間隔10秒。
4、離心去上清，轉速可參照 3,000. rpm/15 minutes/4'C

5組織勻漿經提取液提取后得到的應是組織細胞的總蛋白質

注意事項：

避免血液影響：1 充分放血（找到頸動脈或股動脈，剪斷，放血會比較充分）。
2 對于血流較豐富的器官，比如肝臟，可用生理鹽水從肝門靜脈灌流沖洗。
3勻漿過程應注意維持低溫，可外置冰水浴 Omni公司兩款設備可選配冰槽和Cryo 24多樣品研磨珠均質儀冷卻單元

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