TU-1810SPC紫外/可見分光光度計使用心得

　　TU-1810SPC紫外/可見分光光度計使用心得
 

　　TU-1810SPC紫外可見分光光度計是北京普析通用儀器有限責任公司生產的產品，可獨立完成光度測量、定量測定、光譜掃描、時間掃描、DNA/蛋白質測量及三維圖譜分析等功能，其波長范圍為190-1100 nm，光譜帶寬：0.5、1、2、5 nm(四檔可變狹縫)，波長準確度：±0.3 nm，光度范圍：-0.3～3.0Abs，光度準確度：±0.002 Abs(0～0.5 Abs)，該款分光光度計具有出色的技術指標及穩定可靠的工作特性，流暢的人機對話操作(測定結果穩定可靠，操作簡便)，可滿足用戶各種分析工作的需求諸如光度測量、光譜掃描、時間掃描及三維圖譜分析等，且售后服務良好，深受廣大分析工作者的喜愛，在基層實驗室有廣泛的裝備應用。本實驗室在2005年裝備了該款分光光度計，主要用于光度測量、定量測定、光譜掃描、時間掃描，現就光譜掃描、時間掃描應用情況談幾點體會。
 

　　光譜掃描:主要是為了測量某物質的吸收光譜曲線以獲得該物質的最大吸收波長(λmax)，這對于沒有光譜掃描功能的光度計而言則是比較麻煩且費時的，特別是對于穩定性較差的物質要想獲得準確的λmax還是比較困難的，但對于有光譜掃描功能的光度計而是非常容易的，所以應用好儀器的光譜掃描功能，可以很方便測定出某物質的吸收光譜曲線，而后通過峰值檢出來確定該物質的λmax并用于該物質的光度測定。
 

　　進行光譜掃描時，首先是要確定掃描的波長范圍即起始和終止波長，一般可根據待掃描物質的性質如顏色等大致確定其λmax，如紅色物質其λmax位于500 nm左右，那么其光譜掃描的波長范圍可選擇400～600 nm，例如：鹽酸氯丙嗪可氧化成紅色化合物，經對350～600 nm波長范圍掃描確定其λmax位于525 nm波長處，試劑空白的λmax位于360 nm波長處。
 

　　而對于藍色物質其λmax位于600 nm左右，那么其光譜掃描的波長范圍可選擇500～700 nm，例如：藍色的鐵(Ⅱ)-硫代紫尿酸配合物，經對300～800 nm波長范圍掃描確定其具有兩個吸收峰分別位于658 nm和384nm波長處。具體掃描時先可以選擇一個大致的波長范圍進行掃描，再根據情況進行適當調整，以便獲得合適的掃描光譜圖。
 
 

　　其次是要確定合適的掃描波長間隔，可根據不同的精度要求選擇不同的掃描波長間隔，對λmax數據精度要求較高時可選擇較小的掃描波長間隔如0.2nm，反之可選擇較大的掃描波長間隔如0.5nm或者1nm甚至更大。總之要選擇合適的掃描波長間隔以獲得準確的λmax數據。
 

　　第三是要確定適宜的掃描速度，對于穩定性好的物質可采用慢速和中速掃描，反之對于穩定性差的物質可采用快速掃描，這樣可獲得準確的光譜曲線及λmax數據。
 

　　第四是要確定適宜的吸光度范圍(掃描光譜圖縱坐標)范圍，以便顯示掃描光譜圖的全貌。如圖1、圖2的吸光度范圍分別為0～3.5和0～2.0，對于有負吸光度的可以從負數開始，一切以能顯示掃描光譜圖的全貌為目的。
 

　　2、時間掃描：一是為了監測某化學反應的吸光度隨時間變化的曲線以獲得該化學反應達到的最大反應速率(吸收度)的時間。該功能特別適用于動力學光度法中反應平臺區的確定。二是可以觀察某物質吸光度隨時間變化的曲線，以監測該物質的穩定性。如CN-與異煙酸-硫代巴比妥酸反應首先形成紅色染料，然后逐漸變成藍色，其吸光度A525先是快速上升達到穩定最大值然后很快下降，而A642上升及下降的速度均較緩慢，但室溫下體系在525nm和642nm吸光度分別在2min和35min左右可達最大值且分別在2～3min和15～20min內基本穩定。

 

　　時間掃描時先要確定掃描波長即光度測量波長，一般為物質的最大吸收波長；其次要確定掃描時長，以獲得化學反應的吸光度隨時間變化的趨勢，或物質吸光度隨時間變化的趨勢，以提示物質的穩定性數據。