PCR電泳技術流程步驟

來源：上海邦景實業有限公司 2025年06月09日 15:01

PCR電泳是一種常用的分子生物學技術，結合了聚合酶鏈式反應（PCR）和瓊脂糖凝膠電泳來鑒定和驗證目標DNA片段的存在。這一技術的流程包括以下幾個步驟：

1. DNA提取：從樣品中提取基因組DNA，通常使用特定的試劑盒，如TIANamp Genomic DNA Kit，確保DNA的純度和完整性。

2. PCR擴增：根據目標序列設計特異性引物，通過三步法程序（預變性、變性、退火）進行PCR擴增，擴增特定的DNA區域。擴增條件包括98℃預變性10秒，55℃變性5秒，72℃退火5秒，循環40次。

3. 電泳分析：將PCR產物與DNA Marker混合后，通過瓊脂糖凝膠電泳分離。DNA Marker用于指示DNA片段的大小，幫助判斷擴增產物是否符合預期。電泳時，帶負電的DNA分子向正極移動，根據遷移速度不同形成條帶。

4. 染色與觀察：電泳后的凝膠用核酸染料（如GelRed）染色，使DNA條帶顯色，便于觀察和分析。

5. 結果解讀：通過與Marker對照，可以定性或定量檢測樣品中目標核酸的存在，驗證基因分型、克隆驗證、突變檢測或病原體核酸篩查等。

技術優勢包括高特異性、快速直觀、以及對不同樣本類型的適應性。然而，在實際操作中可能會遇到多種問題，如非特異性擴增、條帶模糊、產物降解、無條帶或引物二聚體等，需要通過優化引物設計、調整退火溫度、控制模板量和酶用量、以及確保電泳條件正確來解決。

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