色譜柱如何選擇？

現在市場上色譜柱種類繁多，不同類型的色譜柱分離對象不同，因此，必須學會精準選擇液相色譜柱，在選擇色譜柱之前一定的認識和了解色譜柱的一些基本知識。今天與大家聊一聊如何精準選擇液相色譜柱。

了解樣品

了解待檢樣品的結構、分子量、溶解性、離子化、極性、pH值等物理化學性質，再參照下圖選擇適合的分離模式和精準的液相色譜柱固定相：

色譜柱參數

色譜柱性能影響因素有很多，例如，硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑，化學性質包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端，下面依次介紹各參數對色譜柱性能的影響，并根據以上參數精準地選擇液相色譜柱。

1、硅膠純度

硅膠純度對強極性化合物的分離重要，殘留金屬離子濃度、硅膠的雜質會影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形，易發生拖尾。

2、色譜柱尺寸

增加色譜柱長度，可以在一定程度上提高柱效，但也會升高壓力和導致峰展寬；含量測定、溶出檢測等對于分離的要求較低，可選用較短的色譜柱，減少運行時間。內徑大，提高載樣量，但也會增加橫向擴散，同樣會導致峰展寬。內徑小的色譜柱靈敏度較高，峰型更窄，但是載樣量較小。如果載樣量滿足要求，需要更高更尖銳的峰提高靈敏度，可以選擇更小內徑，但壓力較大，對系統要求較高。

短柱（15-100mm）運行時間短、柱壓低；

長柱（150-250mm）分辨率高、運行時間長；

小內徑（≤2.1mm）檢測器靈敏度高；

大內徑（3-21.2mm）載樣量高、耐污染、壽命長。

3、顆粒形狀

粒徑球形顆粒柱效高、重現性好、柱床結構均勻，不規則形柱床結構不均勻、流動相線速度不均勻，容易譜帶展寬；當使用粘度較大流動相時，球形顆粒可降低柱壓，延長色譜柱壽命。

4、粒徑

粒徑指柱填料顆粒直徑的大小，實際上色譜柱上所標的粒徑是一個平均值，通常1.5-10μm。粒徑小的色譜柱分離度較好，但色譜柱壓力更大，如果5μm粒徑的色譜柱分離度稍有不足，則同型號3μm色譜柱的分離度一般會提供令人滿意的選擇性。

5、表面積

表面積是指顆粒外表面與內部孔面積的總和，以m2/g表示，高表面積對于多組分樣品的分離具有較強的保留能力、柱容量和分離度；表面積低的柱填料能迅速達到平衡狀態，對于梯度洗脫尤為重要。

6、孔徑

孔徑是指填料顆粒的孔或腔的平均尺寸，范圍是120～300?，多孔色譜填料與目標物的作用絕大部分（＞95%）是發生在填料顆粒的內部，即孔內的，所以孔對于色譜填料也是最重要的參數之一，一款填料孔徑大小(Pore Size)和孔徑分布(Pore Size Distribution)，在絕大多數的色譜分離純化中，起到關鍵性作用。

大孔徑的填料顆粒可以延長大分子溶質在填料表面的滯留時間，達到充分分離，改善峰形，所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子；較小孔徑提供較高的表面積，可用于較大的載荷量，并保留小的有機化合物，可用于小分子有機物到聚合物的分離。

7、不同的載碳量

載碳量越高，固定相傳質效應增加，高載碳量，有利于不易保留化合物的分離，水解穩定性好，重現性好；低載碳量，有利于分析有一定保留的化合物，降低溶劑損耗、減少運行時間。

8、封端

硅膠鍵合相填料中有部分未封端的殘留硅羥基，封端可以減輕待測組分與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應，改善保留和峰形，這對于堿性化合物尤其重要。而不同的封端技術也會直接影響色譜柱的效能。