凍存細胞一般過程

凍存細胞：

1、選對數增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液。

2、按常規方法把培養細胞制備成懸液，計數，使細胞密度達5×10^7／ml左右密度，離心，去上清。

3、加入配制好的凍存液（培養液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外。

4、分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液。

5、旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記。

6、凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時間內，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促進冰晶形成。

操作時應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷。