惡性多發性畸胎瘤細胞；NTERA-2培養操作步驟

惡性多發性畸胎瘤細胞；NTERA-2培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中； 

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

6．快速固定步驟需謹慎操作，以避免細胞形態的改變或抗原的損失。將取出的蓋玻片置于含有4%多聚甲醛的固定液中，室溫下固定10-15分鐘。固定時間不宜過長，以防細胞結構過度硬化。

7．固定完成后，用PBS（磷酸鹽緩沖液）漂洗蓋玻片3次，每次5分鐘，以去除殘留的固定液。此步驟對于后續的免疫染色至關重要，能有效減少背景噪音。

8．接下來進行通透化處理，使用0.1% Triton X-100溶液處理蓋玻片10分鐘，使細胞膜通透性增加，便于抗體進入細胞內與抗原結合。

9．通透后，再次用PBS漂洗3次，隨后進行封閉處理，用含5%胎牛血清的PBS封閉液覆蓋蓋玻片，室溫孵育30分鐘，以減少非特異性抗體結合。

10．最后，根據實驗需求選擇合適的特異性抗體進行免疫染色，并按照抗體說明書推薦的步驟進行孵育、洗滌、顯色等操作，直至完成整個免疫細胞化學檢測流程。通過顯微鏡觀察染色結果，分析惡性多發性畸胎瘤細胞NTERA-2的形態學特征及相關蛋白表達情況。